【摘 要】
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第一部分:Tropic1808基因重组蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 目的:制备Tropicl808基因重组蛋白的单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定.方法:用Tropicl808基因重组蛋白作为抗原
【出 处】
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南通医学院 南通大学医学院 南通大学
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第一部分:Tropic1808基因重组蛋白单克隆抗体的制备及鉴定 目的:制备Tropicl808基因重组蛋白的单克隆抗体,并对其生物学特性进行鉴定.方法:用Tropicl808基因重组蛋白作为抗原免疫BALB/C小鼠,取小鼠脾细胞与小鼠骨髓瘤(SP2/0)细胞融合,经ELI SA筛选和有限稀释法获得分泌单克隆抗体的杂交瘤细胞株,Western Blot等方法对其生物学特性进行鉴定.结果:获得2株识别Tropicl808基因重组蛋白的单克隆抗体的细胞株Ⅱ 4B、Ⅲ 4C.Western Blot法显示该抗体特异性的识别Tropic1808基因重组蛋白;ELI SA法测定杂交瘤细胞培养上清及体内成瘤后产生的腹水的抗体效价分别为1:80、1:1 04;杂交瘤细胞染色体数平均为90~1 02;类鉴定单抗的重链为小鼠IgG1,轻链为κ型.结论:成功制备了Tropicl808基因重组蛋白的单克隆抗体,为进一步研究Tropic1808基因重组蛋白的功能提供了良好的基础.第二部分:周围神经损伤后Tropic1808基因表达蛋白的免疫组织化学研究 目的:研究Tropicl808基因表达蛋白在损伤性大鼠坐骨神经中的表达与分布.方法:以切断12天后的SD大鼠坐骨神经为材料,取损伤处的近侧端和远侧端,冰冻切片.利用已成功制备的Tropicl808基因重组蛋白单克隆抗体,采用酶联间接法进行免疫组织化学染色,对染色切片通过计算机图象处理技术,测量阳性区域的强度与面积.利用Tropic1808基因重组蛋白单克隆抗体和S-100抗体,及相应的FITC和TRITC标记二抗进行双重免疫荧光染色,将染色切片置于激光扫描共聚焦显微镜下观察Tropicl808基因表达蛋白在损伤坐骨神经中的表达部位.结果:与正常坐骨神经比较,损伤神经的近侧端和远侧端施万细胞增生肥大,均有Tropicl808基因表达蛋白的阳性免疫反应,阳性免疫反应物主要分布于施万细胞膜上,远侧端的强度和面积强于和大于近侧端.结论:周围神经损伤后,Tropicl808基因表达蛋白分布于损伤近侧端和远侧端的施万细胞膜上,并且远侧端表达强于近侧端.
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