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第一部分 MUC1对胰腺导管腺癌的诊断效能—-19个病例对照研究的Meta分析
背景：胰腺癌是人类最恶性的肿瘤之一。发病率逐渐升高、病因不明确、早期诊断难、现有的治疗手段对局部晚期或转移性胰腺癌收效甚微造成目前胰腺癌治疗的困境，因此有必要提高胰腺癌的早诊率以改善患者的生存预后。但影像学诊断、肿瘤标志物以及基因突变检测等手段对诊断早期胰腺癌均存在程度不一的局限性，有必要探索更敏感而特异的胰腺癌标记物。
粘蛋白-1(MUC1)是一种高糖基化、高分子量的跨膜糖蛋白，可润滑和保护上皮组织，参与上皮细胞的更新、细胞黏着的调节和细胞信号的传导，并可释放某些活性分子、参与细胞免疫。正常腺上皮细胞有较低水平的MUC1表达。研究发现，在胰腺癌发生的早期可观察到MUC1的过度表达，随着肿瘤的进展而逐渐增加，并且与淋巴结转移、生存期显著相关。因导管腺癌占胰腺恶性肿瘤的90％以上，本研究通过Meta分析探讨MUC1对胰腺导管腺癌的诊断效能，为MUC1可作为胰腺癌标记物提供依据。
研究目的：通过Meta分析探讨MUC1在胰腺导管腺癌中的诊断价值，试图为MUC1可作为胰腺癌标记物提供依据。
检索策略：系统检索MEDLINE数据库(1966-2008)、EMBASE数据库(1966-2008)、中国生物医学文献数据库(CBMdisc，1981-2008)、中国期刊网全文数据库(1979-2008)、ASCO论文集(1995-2008)、Cochrane图书馆等数据库，收集国内外已发表和未发表的相关文献，无语言限制。截止时间为2008-12-31。
纳入标准:
(1)研究类型为前瞻性观察对照研究、或有对照的横断面研究、或回顾性病例对照研究；(2)金标准：病理诊断；(3)研究对象：经金标准诊断的胰腺导管腺癌(不包括导管腺癌以外的恶性胰腺肿瘤或转移性胰腺癌)和胰腺的非肿瘤性病变；(4)干预措施：应用免疫组化技术检测MUC1：(5)必须能从文献全文或摘要中获得完整的四格表数据以计算敏感性、特异性。
资料收集与分析:
由2位评价者分别按上述策略收集资料，严格按纳入和排除标准进行筛选，对符合纳入标准的文献均需要查阅其全文以便进一步作出判断及进行数据提取、归纳，并对纳入研究的方法学质量按内部和外部标准进行评价。本研究的分析指标为敏感度(Sen)、特异度(Spe)、阳性似然比(LR+)、阴性似然比(LR-)、诊断优势比(DOR)、综合受试者工作特征(SROC)曲线下面积(AUC)和Q*指数。本研究的统计分析采用Meta分析软件DiSc1.4完成(从Cochrane图书馆下载)。研究间的异质性分析由Meta分析软件完成。
主要结果：
本研究共纳入19个回顾性病例对照研究，共纳入1228例患者。汇总处理结果显示MUC1免疫组化检测诊断胰腺癌的总敏感度为0.87(95％CI：0.84～0.89)、总特异度为0.68(95％CI：0.64～0.72)、总阳性似然比为4.12(95％CI：2.5～6.79)、总阴性似然比为0.19(95％CI：0.12～0.28)、总DOR为35.41(95％CI：14.88～84.29)。SROC曲线下面积(AUC)为0.9248，SE—0.0232。Q*指数为0.8589。异质性检验提示无阈值效应，但研究间存在异质性。
结论：免疫组化检测MUC1对胰腺导管腺癌有较高的诊断价值，可作为胰腺癌的诊断指标之一。
第二部分 mucl—tfR—pDC316载体的构建
背景：我们的前期研究检索了免疫组化检测MUC1诊断胰腺导管腺癌的文献资料，共纳入19个病例对照研究，涉及1228例患者，结果表明免疫组化检测MUC1对胰腺导管腺癌有一定的诊断价值，可作为胰腺癌的诊断指标之一。但免疫组化检测须获得脏器组织，带有创伤性，有必要进一步研究非创伤性检查手段，如设计靶向载体介导MUC1特异性表达于胰腺脏器等。
研究表明：MUC1启动子在转录水平调控基因表达，具有较高的组织和细胞特异性，MUC1启动子能调控目的基因在MUC1阳性的肿瘤细胞内靶向表达。ETR(Engineered Transferrin Receptor，ETR)基因是工程化的转铁蛋白受体(TfR)的基因片段，ETR保留了编码转铁蛋白受体必需的编码区和启动子序列，而去除了3’端非编码区中参与细胞内铁负反馈调节的序列，ETR既可编码表达TfR，又避免了细胞内高铁浓度对TfR表达的抑制作用，从而不断通过TfR—Tf介导的胞饮作用，吞噬铁离子，达到细胞内有效显像浓度离子铁聚集的目的。
本研究将采用腺病毒作为基因载体，构建一种包含MUC1启动子转录调控序列和ETR基因的重组表达载体。
研究目的：构建包含MUC1启动子转录调控序列和ETR基因的重组表达载体，为胰腺癌分子显像研究提供实验物质基础。
方法：以人血液基因组DNA为模板，利用PCR技术扩增MUC1启动子的转录调控序列。以SW480 cDNA为模板，利用PCR技术扩增tfR基因可编码区的基因片段。采用基因重组方法构建质粒muc1-tfR—pDC316。
结果：扩增的MUC1启动子核心调控序列与参考序列相符，同源性达98％。扩增的tfR基因片段与参考序列相符，同源性达99％。重组质粒的酶切和测序结果和预期相符。
结论：本研究成功扩增MUC1启动子转录调控序列及获得tfR基因可编码区基因的克隆，并构建了mucl—tfR—pDC316重组质粒，为进一步运用该质粒转染胰腺癌细胞提供实验物质基础。