Nimbin的提取、分离、纯化及生物活性研究

来源 :中国林业科学研究院 | 被引量 : 0次 | 上传用户:tony33334444
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本论文主要目标是鉴定印楝种仁内nimbin成分的化学结构;建立nimbin的HPLC定量分析方法;系统考察常规溶剂法对nimbin的提取效果;比较超声波、微波辅助溶剂法对nimbin提取率的影响;探索制备nimbin纯化合物经济、快速、有效的分离精制流程体:研究nimbin粗提物的室内生物活性,分析nimbin的主要作用方式。1.通过熔点测定、紫外(UV)光谱、红外(IR)光谱、液相一质谱(HPLC-MS)联用和核磁共振(NMR)的分析,验证了制备得到的nimbin纯化合物的化学结构。2.建立了nimbin的HPLC定量分析方法。色谱条件为,ODS色谱柱,150×4.6mm i.d.,10μm;流动相为甲醇:水(V/V)=70:30;紫外检测器,检测波长217nm;流速1mL/min;柱温为室温。得到(1)nimbin的保留时间为11.3min左右;(2)nimbin质量计算公式为X=(Y—40398)/1811050,Y-峰面积,X-nimbin质量(μg)。3.首次系统考察了常规溶剂法提取nimbin过程中各因素对nimbin提取率的影响,通过正交实验得到优化条件。各因素的影响大小依次为料液比>提取时间>提取温度;优化条件为:料液比1:5,提取温度40℃,提取时间3hr×3;在nimbin无水乙醇提取液的后处理过程中,乙酸乙酯是较理想的萃取溶剂,经适宜条件下提取后,其萃取物中nimbin的含量及nimbin的提取率均最大,分别为3.406%,72.197%。4.首次进行了超声波、微波辅助溶剂法提取nimbin的研究。考察了超声波、微波作用时间,超声波、微波功率以及料液比对nimbin提取率的影响,发现此两种提取方式下nimbin的提取率均低于常规溶剂法,但是可以明显缩短提取时间,减少溶剂用量。5.首次成功探索了一次硅胶柱层析→二次Florisil柱层析→甲醇结晶的分离精制流程,制备得到纯度为96.072%的nimbin纯化合物。6.研究了常规溶剂法提取得到的nimbin粗提物对棉铃虫幼虫的室内抑制生长发育和毒杀生物活性。实验结果表明(1)nimbin粗提物对棉铃虫幼虫的生长发育具有明显的抑制作用,且强于毒杀活性,当稀释800倍时接虫5天后检查结果,棉铃虫幼虫指数减退率达74.59%。(2)nimbin粗提物对棉铃虫幼虫具有较强的毒杀活性,且好于印楝素原药,当稀释至1600倍时5天后检查结果,校正死亡率达到55.32%:而印楝素原药即使稀释至100倍时同样作用于棉铃虫幼虫5天后检查结果,校正死亡率也只有24.44%。(3)随着nimbin粗提物浓度的降低,棉铃虫幼虫指数减退率和校正死亡率都随之降低,且其速效性较弱。(4)nimbin粗提物5天对棉铃虫幼虫毒力反应的致死中量(LC50)值为1616.5ppm。
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