黑穗醋栗‘布劳德’组培快繁及直接再生研究

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本文以黑穗醋栗‘布劳德’为试验材料,在试验过程中对外植体消毒处理、快繁体系建立、愈伤组织诱导及直接离体再生四个方面的相关问题进行了详细的研究。本试验成功地建立了黑穗醋栗‘布劳德’品种组培快繁体系,为今后开展育种研究奠定了基础。主要得出以下结论:1取一年生黑穗醋栗‘布劳德’茎段作为外植体材料,消毒方式采用20%次氯酸钠消毒5min处理为最佳,成活率达83.33%,污染率10%。2挑选MS、1/2MS、1/2MS+0.5 mg/L IAA、MS+Ac和Anderson五种培养基对黑穗醋栗‘布劳德’进行增殖培养。其中使用Anderson培养基不仅有利于‘布劳德’试管苗地上地下部分生长,还抑制了试管苗褐变,使试管苗正常生长。3在基质Ⅰ,蛭石:珍珠岩=1:1(V/V)中培养的试管苗最佳,移栽成活率达88.33%。建立黑穗醋栗‘布劳德’快繁体系。4在诱导愈伤组织过程中,用茎段、叶柄和叶片作为外植体,添加不同浓度及种类的激素诱导愈伤;其中在培养基MS+5 mg/L KT+0.5 mg/L NAA的诱导率最高93.33%,但愈伤组织少部分褐变,结构过于紧密,增殖培养较困难。5添加不同浓度的Ag NO3、Vc和PVP控制愈伤组织褐化,其中在培养基MS+5 mg/L KT+0.5 mg/L NAA中添加0.5g/L PVP可以有效的控制愈伤组织褐化,褐变率6.67%,诱导率96.67%。6设计正交试验探究最佳的激素组合配比对愈伤组织增殖培养的影响,其中MS+5mg/L KT+1 mg/L NAA+0.1 mg/L 2,4-D愈伤组织增殖效果最佳,增殖倍数最高为5.3167,且可以用于再生研究。7试验以茎段为外植体,MS、White、1/2 MS和Anderson为进本培养基,添加不同浓度及种类的激素诱导再生,其中在MS+4 mg/L KT+0.5 mg/L IAA培养基上进行培养,可实现黑穗醋栗‘布劳德’直接再生。
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