高迁移组蛋白1诱导大鼠肺泡巨噬细胞表达诱生型一氧化氮合酶的机制及其在急性肺损伤发生中的作用

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高迁移组蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1),分子量约30 kD,为一进化相当保守的非组蛋白染色质结合蛋白,在细胞内参与稳定核小体,促进基因转录。1999年,Wang H.等人发现HMGB1是体内单核巨噬细胞在受脂多糖刺激后释放的一种细胞因子,是内毒素血症晚期作用的主要介质。近期研究认为,HMGB1可促进单核/巨噬细胞及中性粒细胞释放多种炎症介质,也可诱导急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的发生。ALI是一个以肺实质弥散性炎症为特征的疾病过程,炎症调节物在ALI发病中的作用一直是研究的热点。不断增多的证据表明,一氧化氮(nitric oxide,NO)在ALI的发病中有重要的作用。因为肺泡巨噬细胞表达丰富的诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide,iNOS),是发生炎症的肺组织中NO的重要来源。有关NO在HMGB1诱导ALI中所起的作用至今未见报道。本实验旨在观察HMGB1是否可以上调大鼠肺泡巨噬细胞表达iNOS,并探讨其分子机制,观察此过程在ALI发生中的作用,为阐明ALI的发病机理提供更多的理论依据。研究包括以下几方面: 一、HMGB1诱导大鼠肺泡巨噬细胞表达iNOS在ALI发生中的作用 经尾静脉注射三氯化钆(GdCl3)封闭肺泡巨噬细胞,经腹腔注射氨基胍(AG)拮抗iNOS,观察肺泡巨噬细胞表达的iNOS在经支气管灌注重组人HMGB1(rhHMGB1)诱导大鼠ALI发生中的作用。通过灌洗支气管肺泡获得肺泡巨噬细胞和支气管肺泡灌洗(BAL)液,分别采用原位杂交和免疫细胞化学法定位iNOS mRNA和蛋白,应用Greiss反应检测BAL液中NO2-/NO3-(NOx)含量,通过分析BAL液中乳酸脱氢酶
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