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高迁移组蛋白1(high mobility group box 1,HMGB1),分子量约30 kD,为一进化相当保守的非组蛋白染色质结合蛋白,在细胞内参与稳定核小体,促进基因转录。1999年,Wang H.等人发现HMGB1是体内单核巨噬细胞在受脂多糖刺激后释放的一种细胞因子,是内毒素血症晚期作用的主要介质。近期研究认为,HMGB1可促进单核/巨噬细胞及中性粒细胞释放多种炎症介质,也可诱导急性肺损伤(acute lung injury,ALI)的发生。ALI是一个以肺实质弥散性炎症为特征的疾病过程,炎症调节物在ALI发病中的作用一直是研究的热点。不断增多的证据表明,一氧化氮(nitric oxide,NO)在ALI的发病中有重要的作用。因为肺泡巨噬细胞表达丰富的诱生型一氧化氮合酶(inducible nitric oxide,iNOS),是发生炎症的肺组织中NO的重要来源。有关NO在HMGB1诱导ALI中所起的作用至今未见报道。本实验旨在观察HMGB1是否可以上调大鼠肺泡巨噬细胞表达iNOS,并探讨其分子机制,观察此过程在ALI发生中的作用,为阐明ALI的发病机理提供更多的理论依据。研究包括以下几方面: 一、HMGB1诱导大鼠肺泡巨噬细胞表达iNOS在ALI发生中的作用 经尾静脉注射三氯化钆(GdCl3)封闭肺泡巨噬细胞,经腹腔注射氨基胍(AG)拮抗iNOS,观察肺泡巨噬细胞表达的iNOS在经支气管灌注重组人HMGB1(rhHMGB1)诱导大鼠ALI发生中的作用。通过灌洗支气管肺泡获得肺泡巨噬细胞和支气管肺泡灌洗(BAL)液,分别采用原位杂交和免疫细胞化学法定位iNOS mRNA和蛋白,应用Greiss反应检测BAL液中NO2-/NO3-(NOx)含量,通过分析BAL液中乳酸脱氢酶