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本文主要从以下几个部分展开论述: 第一部分 人子宫内膜细胞的培养与免疫细胞化学检查 目的:建立人子宫内膜细胞体外混合培养方法,并对细胞的类型进行免疫细胞化学鉴定,为进行纳米铜浸提液对子宫内膜细胞的影响实验提供材料。 方法:对人子宫内膜细胞进行体外培养,并冷冻保存及复苏培养;检查细胞形态,同时进行角蛋白CK-19、波形蛋白免疫染色。 结果:本研究获取的人子宫内膜细胞,为腺上皮细胞和间质细胞。细胞生长良好,角蛋白或波形蛋白表达呈阳性,腺上皮细胞多能传2~3代,3代后细胞后期出现细胞胞体膨大,胞浆内空泡增多,最后从瓶壁脱落。间质细胞具有良好稳定性,可传6~8代。 结论:本研究体外培养细胞在2~3代内具良好的稳定性,可为下一步实验研究提供体外混合培养的人子宫内膜细胞。 第二部分 Nano-Cu/LDPE复合材料浸提液对体外培养人子宫内膜细胞超微结构的影响 目的:比较检查人子宫内膜细胞与不同浓度纳米铜浸提液共培养后子宫内膜细胞超微结构变化,从超微结构水平比较分析不同浓度纳米铜浸提液对人子宫内膜细胞的影响程度。 方法:体外培养人子宫内膜细胞,经免疫细胞化学法鉴定后,用高低浓度的纳米铜浸提液与内膜细胞共培养(高浓度组:20μg/ml;低浓度组:5μg/ml),共培养48小时后分别弃其上清液,收集细胞。采用透射电镜技术检查两种浓度的浸提液干预后人子宫内膜细胞超微结构的改变。 结果:腺上皮细胞:低浓度组:微绒毛相对空白对照组稀疏,余未见明显异常。高浓度组:部分细胞微绒毛呈棒状,规则分布于细胞表面,但较低浓度组减少,变短,部分细胞微绒毛几乎缺失,溶酶体增多。间质细胞:受纳米铜浸提液影响较小,主要表现为微绒毛的变化。 结论:结果提示,低浓度纳米铜浸提液对子宫内膜细胞影响轻微,高浓度纳米铜浸提液对子宫内膜细胞的影响主要体现为细胞表面特殊分化结构发生了改变。 第三部分 Nano-Cu/LDPE复合材料浸提液对体外培养人子宫内膜细胞培养液中细胞因子t-PA、PAI-1水平的影响 目的:检测纳米铜浸提液与人子宫内膜细胞共培养液中细胞因子t-PA、PAI-1的水平,分析纳米铜浸提液浓度与置器后子宫异常出血的关系。 方法:体外培养人子宫内膜细胞,与不同浓度的纳米铜浸提液共培养(高浓度组:20μg/ml;低浓度组:5μg/ml、1.25μg/ml、0.3125μg/ml、0.078125μg/ml),共培养12、24、48h后分别取其上清液,采用ELISA方法检测其中t-PA、PAI-1的含量。 结果:PAI-1的浓度,与对照组相比,除20μg/ml有显著差异性(P<0.05)外,其余组无明显差异性(P>0.05),而随着时间的推移,PAI-1浓度呈上升趋势;t-PA的浓度在各组间无明显差异。 结论:低浓度纳米铜浸提液对细胞因子的浓度影响不大,而在高浓度纳米铜浸提液组细胞分泌PAI-1减少;另外随着时间的推移,培养细胞的上清液中PAI-1浓度呈上升趋势。