论文部分内容阅读
目的:探讨肝外胆管癌组织中胆汁酸膜受体TGR5的表达与肝外胆管癌预后以及上皮间质表型转化（Epithelial-to-mesenchymal transition,EMT）之间的关系。并分析在胆汁酸作用下胆汁酸膜受体TGR5与胆管癌细胞形态学改变以及与EMT标志物的相关性。方法:回顾性分析2015年1月至2020年1月西部战区总医院全军普通外科中心收治的88例肝外胆管癌患者的病例资料。收集其胆管癌病理组织,分析肝外胆管癌组织与癌旁组织TGR5表达水平的差异,以及与患者临床病理特征及临床预后的关系。其次,利用慢病毒RNA干扰降低人胆管癌细胞QBC-939中TGR5的表达水平。此外,使用TGR5激动剂脱氧胆酸（Deoxycholic acid,DCA）刺激细胞,观察其形态学改变。并且通过蛋白质免疫印迹试验（Western blotting,WB）来检测EMT相关标志蛋白的表达水平。结果:1)肝外胆管癌组织与癌旁组织TGR5相对表达水平比较:与癌旁组织相比,肝外胆管癌组织中TGR5的相对灰度值显著降低,TGR5在肝外胆管癌组织中的相对表达水平高于癌旁组织（P＜0.001）。2)肝外胆管癌患者的临床及病理特征分析:性别:男性55例（62.5%）、女性33例（37.5%）;年龄:中位年龄65岁,高于65岁38例（43.2%）,低于65岁50例（56.8%）;病理分化程度:低分化22例（25%）,中分化53例（60.2%）,高分化13例（14.8%）;神经受累情况:有神经受累62例（70.5%）,无神经受累26例（29.5%）;脉管受累情况:有脉管受累58例（65.9%）,无脉管受累30例（34.1%）;淋巴结转移情况:有淋巴结转移24例（27.3%）,无淋巴结转移46例（52.3%）,无法评估淋巴结是否转移18例（20.5%）;TNM分期:Ⅰ期8例（11.4%）,Ⅱ期36例（51.4%）,Ⅲ期 25 例（35.7%）,Ⅳ期 1 例（1.4%）。3)肝外胆管癌组织TGR5相对表达水平与临床病理特征的相关性分析:TGR5相对表达水平与病理分化程度呈负相关（r=—0.304,P＜0.01）。然而其与性别、年龄、神经受累情况、脉管受累情况、淋巴结转移情况及TNM分期相关性无统计学意义（P均＞0.05）。4)肝外胆管癌组织TGR5相对表达水平与患者预后的相关性分析:TGR5高表达水平组患者无瘤生存时间（20.45±12.75）及总生存时间（23.32±12.48）显著低于TGR5极低表达水平组（无瘤生存时间:29.00±11.65,总生存时间:32.95±12.35）及TGR5低表达水平组（无瘤生存时间:30.87±8.50,总生存时间:34.61±9.41）（P均＜0.05）。并且,TGR5中表达水平组患者无瘤生存时间（24.48±10.34）及总生存时间（27.62±11.04）也显著低于TGR5低表达水平组（无瘤生存时间:30.87±8.50,总生存时间:34.61±9.41）（P均＜0.05）。此外,TGR5 相对表达水平与患者预后呈负相关（无瘤生存时间b=—0.230,P＜0.01;总生存时间b=—0.244,P＜0.01）。5)肝外胆管癌组织TGR5相对表达水平与EMT标志性蛋白表达水平的相关性分析:肝外胆管癌组织TGR5表达水平与E-钙黏蛋白及CK19表达水平呈负相关（E-钙黏蛋白rs=—0.780,P＜0.001;CK19 rs=-0.795,P＜0.001）。此外,肝外胆管癌组织TGR5表达水平与波形蛋白及N-钙黏蛋白表达水平呈正相关（波形蛋白rs=0.816,P＜0.001;N-钙黏蛋白rs=0.820,P＜0.001）。6)与对照组相比,脱氧胆酸诱导组中胆管癌细胞QBC-939形态学发生改变,主要表现为细胞离散,呈现更多的纤维母细胞形态。此外,干扰组中抑制TGR5表达后,上述改变并不显著。脱氧胆酸诱导组中E-钙黏蛋白表达水平显著低于对照组和TGR5干扰组（P＜0.05）,而其在对照组与TGR5干扰组组间无显著差异（P＞0.05）。此外,脱氧胆酸诱导组中N-钙黏蛋白表达显著高于对照组和TGR5干扰组（P＜0.05）,而其在对照组与TGR5干扰组组间无显著差异（P＞0.05）。结论:1)肝外胆管癌组织中TGR5表达水平高于相对应的癌旁组织。提示TGR5高表达可能与肝外胆管癌发生风险增加存在潜在关联。2)肝外胆管癌组织中,TGR5表达水平越高,肿瘤分化程度越低。此外,TGR5表达水平越高,肝外胆管癌患者临床预后越差。表明TGR5的相对表达水平对肝外胆管癌的恶性程度具有预警潜力。3)肝外胆管癌组织TGR5表达水平与EMT特异性蛋白表达相关,表明TGR5可能参与了胆管癌相应的EMT过程。4)脱氧胆酸诱导下TGR5高表达可促进胆管癌细胞中EMT特异性蛋白表达。此外,脱氧胆酸诱导下TGR5高表达可促进胆管癌细胞形态学改变。提示胆汁酸可能通过介导TGR5促进胆管癌细胞EMT过程,进而可能促进其侵袭、迁移。综上所述,TGR5的表达水平与胆管癌的预后相关,可作为评估和预测肝外胆管癌的有潜力的生物标志物。胆汁酸可能通过介导TGR5促进胆管癌细胞发生EMT,并可能促进肿瘤的侵袭和转移。