奶牛乳腺炎是奶牛的多发病和造成损失最为严重的疾病之一，而且还给人类的健康带来了潜在的危害。目前，引起奶牛乳腺炎的病原菌众多，且治疗时大量抗生素的使用不但使奶牛对病原菌产生抗性，而且抗生素的残留问题也日益影响着食品卫生安全和人类健康等问题。利用疫苗来预防和控制奶牛乳腺炎是一种安全、经济、有效的方法。本课题针对引起奶牛乳腺炎的主要致病菌进行了分离鉴定，并制备了三联灭活苗，通过不同的试验动物从免疫佐剂和免疫途径的方面进行了疫苗的免疫效力评价。本研究内容分为四部分： 试验一奶牛乳腺炎主要致病菌的分离鉴定与致病性分析本试验对山东省济南、泰安和临沂等地区5个奶牛场的160份乳样进行了临床型乳腺炎和隐性乳腺炎的判定检测，并结合常规生化鉴定与PCR鉴定方法对所采集乳样的主要致病菌进行了分离鉴定。结果表明，160份乳样中有127份呈乳腺炎阳性，其中临床型乳腺炎占36.22％，隐性乳腺炎占63.18％；从这些乳样中分离到了主要致病菌金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌，金黄色葡萄球菌依据溶血型的不同主要有α溶血、β溶血、α+β溶血和不溶血这四种；大肠杆菌依据O抗原诊断血清得出主要有O<,2>、O<,21>、O<76>和O<,88>这四种型；无乳链球菌依据溶血型主要为β溶血型。并且对主要病原菌进行了致病性分析，筛选出典型的致病性较强的菌株。 试验二奶牛乳腺炎三联灭活苗的制备与实验室免疫效力评价本试验从乳腺炎患病奶牛乳样中分离到典型的金黄色葡萄球菌、大肠杆菌和无乳链球菌，并研制出这三种菌的奶牛乳腺炎三联灭活疫苗。为了初步评估该疫苗的免疫效力，在小白鼠上进行了免疫攻毒试验，用间接ELISA法检测了小白鼠的抗体水平，结果表明，此疫苗具有较好的免疫性，与对照组相比，显著提高了小白鼠的抗体效价(P<0.01)，提高了小白鼠抵抗多种病原菌侵袭的能力，免疫保护率平均达到73.3％。 试验三不同免疫佐剂的三联灭活苗的免疫效力评价本试验旨在通过不同免疫佐剂疫苗的效力比较，筛选出较为实用、安全、有效的佐剂疫苗。本试验以新西兰白兔和荷斯坦奶牛为试验动物，分别用油乳佐剂苗和铝胶佐剂苗进行了免疫试验，比较两种佐剂疫苗的免疫效力，结果表明，油乳佐剂苗和铝胶佐剂苗都能提高机体的免疫力，显著提高(P<0.01)血清中的抗体水平，但油乳佐剂苗比铝胶佐剂苗更能显著提高(P<0.01)血清中的抗体水平，并且能够维持较长时间的高抗体水平，显著降低奶牛乳汁中的体细胞数，而且油乳佐剂苗稳定性较好，价格低廉，易于在生产实践中大量应用。试验四三联灭活苗在不同的免疫途径下的免疫效力评价本试验旨在通过对奶牛乳腺炎三联灭活苗在后海穴注射免疫与常规注射免疫的效力比较，寻找更为有效、方便的免疫途径。本试验以荷斯坦奶牛为试验动物，分别在后海穴、臀肌和皮下接种乳腺炎灭活疫苗，比较其免疫效力，结果表明，后海穴免疫首先能节省疫苗用量，同时还可以提前产生坚强免疫力，显著提高(P<0.01)血清中的抗体水平，维持较长时间的高抗体水平；其次接种疫苗时因针刺穴位的作用，显著提高了血液中的白细胞总数和淋巴细胞数，增强了免疫细胞的功能；‘最后显著降低(P<0.01)乳汁中的体细胞数。