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断奶仔猪腹泻(Post-weaning diarrhoea,PWD)是影响仔猪生产效益的主要因素,蛋白质是仔猪生长的必需营养物质,可通过结肠发酵、过敏反应等引发仔猪腹泻。而结肠作为吸收水分的主要部位,对腹泻的发生和发展有关键作用。已证实饲粮蛋白质可在结肠发酵产生氨氮(ammonia nitrogen,AN),但有关AN对结肠损伤的机制和途径还鲜有报道。为研究饲粮蛋白水平对断奶仔猪结肠内AN含量、结肠损伤和腹泻的影响,选取了96头25日龄断奶的杜长大三元杂交仔猪,随机分为4组,适应饲养7 d后分别饲喂18%、20%、22%和24%蛋白水平的饲粮,全天观察腹泻情况并进行腹泻评分,并于饲喂后6、24、48、72和96 h时采样测定胃内容物pH、胃蛋白酶和糜蛋白酶活性、血清胃肠道激素P物质(SP)、胃动素(MTL)、胃泌素(GAS)和血管活性肠肽(VIP)含量、血清尿素氮(BUN)和结肠内容物AN含量、血清和结肠黏膜细胞因子(IL-1β、TNF-α、IL-4、IL-10)、血清急性期反应蛋白(CRP)及氧化指标(SOD、MDA、iNOS、NO),并进行结肠病理形态学观察,结果表明,在整个试验期内:(1)饲粮蛋白水平对断奶仔猪生产性能无显著影响,但24%蛋白组仔猪ADFI(平均日采食量)最高,F/G(料重比)最低(P>0.05)。在饲喂后24~72 h间,24%蛋白组仔猪腹泻评分显著或极显著高于20%蛋白组(P<0.01或0.05)。(2)除48 h外,其余时间点18%、24%蛋白组仔猪胃内容物pH均显著或极显著高于20%蛋白组(P<0.01或0.05);在整个试验期,24%蛋白组仔猪胃蛋白酶和糜蛋白酶活性均低于20%蛋白组,胃蛋白酶活性在6、72 h时有显著差异(P<0.01或0.05),糜蛋白酶活性在24 h时有显著差异(P<0.05)。24%蛋白组仔猪血清SP、MTL、GAS含量分别在饲喂后24~72 h、6~72 h和24~96 h时均高于20%蛋白组,血清VIP含量在48~96 h间均显著低于20%蛋白组(P<0.05)。表明24%蛋白水平饲粮可通过升高仔猪胃内pH、降低胃、糜蛋白酶活性来降低仔猪消化能力。(3)除6 h外,其余时间点24%蛋白组仔猪结肠内容物AN含量均高于18%、20%蛋白组,在24、72 h时有显著差异(P<0.01或0.05);在整个试验期,22%、24%蛋白水平组仔猪血清BUN含量均高于18%、20%蛋白组。以上结果表明,22%和24%蛋白水平饲粮可升高仔猪血清BUN含量和结肠内AN含量,降低蛋白质利用率。(4)在饲喂后24~96 h内,24%蛋白组仔猪结肠黏膜IL-1β含量均高于20%蛋白组(P<0.01或0.05);除48 h外,其余各时间点24%蛋白组仔猪黏膜TNF-α含量均高于20%蛋白组;在整个试验期,24%蛋白组仔猪血清CRP含量均高于20%蛋白组,在24、48 h时有显著差异(P<0.01或0.05);在48~96 h之间,20%蛋白组仔猪血清中IL-4含量均高于其余三组,黏膜IL-4含量在6~72 h之间低于22%和24%蛋白组,在48 h时有显著差异(P<0.05);在整个试验期,24%蛋白组黏膜IL-10含量均低于20%蛋白组,在24、72 h时有显著差异(P<0.01或0.05)。(5)在24~72 h之间,24%蛋白组仔猪血清SOD活力均低于20%蛋白组,在48、72 h时有显著差异(P<0.05),黏膜SOD活力在6、48、72、96 h时低于20%蛋白组;在整个试验期,24%蛋白组仔猪血清和黏膜MDA含量、iNOS活性均高于20%蛋白组;除48 h外,其余时间点24%蛋白组仔猪血清NO含量均高于20%蛋白组,但无显著差异(P>0.05);在整个试验期,24%蛋白组仔猪黏膜NO含量均高于20%蛋白组,在6、48、96 h时有显著差异(P<0.01或0.05)。(6)病理形态学结果表明:18%蛋白组仔猪在72、96 h时,部分结肠黏膜脱落,在96 h时黏膜严重脱落,无法观察到其正常结构;20%蛋白组仔猪结肠在48~96 h间仅可见部分黏膜脱落、黏膜上皮细胞排列紧密,无炎性细胞浸润;24%蛋白组仔猪结肠黏膜脱落、上皮细胞坏死,在48 h时无法观察到正常结构,但在72 h时有所修复。(7)相关性分析结果显示:仔猪胃蛋白酶活性与胃内pH呈极显著负相关(P<0.01);糜蛋白酶活性与血清BUN、结肠内容物AN含量均呈极显著负相关(P<0.01);结肠内容物AN与黏膜IL-1β含量、黏膜IL-1β含量与腹泻评分均呈显著正相关(P<0.05),黏膜IL-1β与黏膜IL-10含量、黏膜IL-10含量与腹泻评分均呈显著负相关(P<0.05)。AN含量与血清iNOS活性、血清iNOS活性与黏膜IL-1β含量均呈显著正相关(P<0.05)。结论:高于20%蛋白水平的饲粮可通过升高胃内pH、降低胃蛋白酶和糜蛋白酶活性来升高结肠内AN含量,加剧腹泻。这主要是由于AN诱导结肠黏膜促炎因子IL-1β表达量升高、抗炎因子IL-10表达量降低、血清iNOS活性升高后,炎症、氧化综合作用引发结肠损伤和腹泻。因此,结合腹泻评分来看,将饲粮蛋白水平控制在20%能够有效减少结肠蛋白质发酵,降低结肠内AN含量并缓解腹泻,提高生产性能。