视网膜母细胞瘤动物模型的建立与评价标准研究

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视网膜母细胞瘤(Retinoblastoma,RB)是一种发生于婴幼儿眼内的常见原发性恶性肿瘤,其恶性程度高,易发生全身转移。RB发病机制及药物的研发都需要先建立动物模型。目前,对于小鼠模型和斑马鱼模型的评价指标尚不够清晰,本研究目标是建立RB小鼠模型和斑马鱼模型,建立RB小鼠模型和斑马鱼模型的评价标准。目的:建立RB小鼠和斑马鱼模型,确定RB小鼠和斑马鱼模型的评价标准。方法:RB小鼠模型的建立方法是选用人源视网膜母细胞Y-79,使用CCK-8的方法获得生长曲线,然后将一定数量的细胞注入BALB/c-nu小鼠的玻璃体内,通过裂隙灯、病理组织学和免疫组化对RB小鼠模型进行检查。RB斑马鱼模型的建立方法是使用慢病毒转染的方法将RB细胞进行荧光转染,使用分选型流式细胞仪进行细胞分选,将分选后的细胞培养扩增,进行流式分析,然后,将一定数量的荧光细胞注入斑马鱼玻璃体内进行模型构建,最后分别通过体式荧光显微镜观察、OCT观察的方法对模型进行活体无损成像检查。结果:RB小鼠模型通过裂隙灯观察到肿瘤在眼内为云团样,随后面积扩大,肿瘤突出眶外;通过组织病理学检查2例动物为分化型的菊形团或小花样肿瘤结构,9例动物为未分化型的团块样生长的肿瘤结构,肿瘤未发生转移;通过免疫组化染色主要表现为未分化型(菊形团或小花样结构)NSE、GFAP、S100阳性,未分化型(团块状等)为NSE、GFAP、S100阴性。将RB细胞植入斑马鱼玻璃体内,体式荧光显微镜下显示斑马鱼眼内有肿瘤样荧光物质,OCT断层成像显示斑马鱼玻璃体内存在肿瘤样团状物。结论:(1)建立RB小鼠模型,观察到眼内云团样物质,病理学观察到菊形团、小花样或团块样生长的结构,免疫组化染色观察到未分化型(菊形团或小花样结构)NSE、GFAP、S100阳性,未分化型(团块状等)为NSE、GFAP、S100阴性,可判断为RB小鼠模型,可作为RB小鼠模型的评价指标。(2)初步建立RB斑马鱼模型,RB细胞植入斑马鱼玻璃体内,体式荧光显微镜下显示眼内有肿瘤样荧光物质,OCT断层成像显示玻璃体内存在肿瘤样团状物可判断为RB斑马鱼模型,可作为RB斑马鱼模型的评价指标。
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