【摘 要】
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目的1.研究使用Mitronic主动脉打孔器构建简化气管食管瘘模型的方法。2.使用人脂肪间充质干细胞瘘口局部注射,研究干细胞治疗的安全性和有效性。3.对瘘口组织进行测序及生信分析,探索瘘口愈合过程中的差异蛋白表达。方法1.动物准备比格犬13只,随机分为3组:第1组:空白组,无操作,1只（1101）;第2组:手术组,造瘘手术+磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline,PBS）局
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目的1.研究使用Mitronic主动脉打孔器构建简化气管食管瘘模型的方法。2.使用人脂肪间充质干细胞瘘口局部注射,研究干细胞治疗的安全性和有效性。3.对瘘口组织进行测序及生信分析,探索瘘口愈合过程中的差异蛋白表达。方法1.动物准备比格犬13只,随机分为3组:第1组:空白组,无操作,1只（1101）;第2组:手术组,造瘘手术+磷酸缓冲盐溶液（phosphate buffer saline,PBS）局部注射,6只（2101-2016）;第3组:干细胞移植组,造瘘手术+干细胞移植,6只（3101-3106）。2.手术方法诱导麻醉,造瘘动物行TEF构建手术,于颈部正中切开皮肤,游离气管及食管,于气管后壁和食管前壁使用打孔器行气管食管造瘘,瘘口直径8 mm,移植组在造瘘后,注射器在瘘口局部的气管膜部和食管粘膜下组织注射2 ml人脂肪间充质干细胞,细胞总量为10~6,手术组动物在造瘘后于瘘口相同部位注射等量PBS缓冲液,注射后使用3-0缝线缝合气管和食管瘘口,缝合切口,手术完成。3.术后处理1.首先行鼻饲灌胃营养,若对鼻饲插管不耐受即立即停止,全静脉营养作为代替。2.记录一般情况,每周使用纤支镜观察。3.计划于35日统一处死,对瘘口大体情况、肺部情况和Masson染色切片观察。4.对移植组和手术组各选取3例瘘口组织送检转录组测序并进生物信息学分析。结果1.Midtronic主动脉打孔器可有效简化TEF模型的构建过程。2.未移植组中3只和移植组1只动物于术后首周内死亡,移植组2只动物于术后32天和35天死亡,其余动物存活至35天安乐死。3.在移植组中除去首周死亡的动物,其瘘口直径相较于造瘘的8 mm直径,有2例瘘口完全封闭,2例瘘口直径缩小至3 mm,1例直径缩小至4 mm;在未移植组中除去首周死亡的动物,其瘘口直径相较于造瘘的8 mm直径,2例瘘口直径缩小至7 mm,1例直径缩小至6.5 mm。移植组的术后平均瘘口直径小于未移植组。4.干细胞移植后,移植组肺部实变范围小于未移植组。5.生物信息学分析表明HIF-1α、TNF-1和PI3K/Akt信号通路相关蛋白存在差异表达。结论1.Medtronic打孔器可简化TEF模型构建过程。2.干细胞移植可促进瘘口愈合,未发现明显毒副作用并具备良好的有效性和安全性。3.干细胞对瘘口愈合的促进作用可能通过对HIF-1α、TNF-1和PI3K/Akt信号通路的调节实现,但具体机制仍需进一步的验证和研究。
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