猪感染戊肝病毒后体内抗体与抗原相关性及病毒准种现象研究

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戊型肝炎(Hepatitis HE)对人类健康具有很大的危害,是典型的急性和爆发型肝炎。戊型肝炎的病原体为戊型肝炎病毒(Hepatitis Evirus,HEV),目前HEV分为4个主要的基因型:1型主要分布于亚洲和非洲,2型分布于墨西哥,3型主要分布于美国和欧洲国家,但近些年也发现存在于日本、韩国、中国大陆和台湾,4型包括从人和猪上分离的中国株、中国台湾株以及部分日本株。猪在动物宿主中感染率最高,病毒载量最大,因此,被认为是HEV最主要的动物贮存宿主。而且从中分离到的病毒和人源毒株也有较高的同源性。为了摸清猪群中感染HEV后个体的机制、病毒持续存在的情况以及它们在猪群中的演变规律,我们进行了以下研究。首先,为研究猪戊肝病毒是否存在准种现象,采用逆转录-巢式聚合酶链反应法(RT-nested-PCR)对4株猪戊肝病毒第2可读框(ORF2)部分序列进行PCR扩增,将产物克隆后,每个毒株分别随机挑取20个阳性克隆测序,进行DNA序列分析。结果显示4株HEV不同克隆间的ORF2核苷酸序列同源性分别为96.8%~99.7%、98.8%~99.7%、98.8%~99.7%和100%,有变异的克隆核苷酸序列与上海株(SAAS-JDY5)同源性为96.8%~100%。由此证实感染戊肝病毒的猪个体内存在HEV准种。第二部分的研究是感染HEV的猪体内抗体和抗原消长规律。结果表明猪个体感染HEV后,抗体的水平要持续很长一段时间,并且有的个体在第24周时抗体可维持较高的水平。对血清中的HEV RNA检测发现,一般仅存在2~3三周左右,但粪便的HEV RNA持续的时间较长,最长可持续16周左右。为了探索抗体、抗原的关系和准种存在情况,分别在崇明某猪场采集2月龄猪血清样品30份和浦东某猪场采集1~2年母猪血清样品、粪便样品各50份。结果发现在高抗体水平下血清和粪便中一样存在HEV RNA,而且粪便中的HEV RNA阳性率要高于血清中的HEV RNA阳性率。同时,在我们调查的血清和粪便HEV RNA阳性样品中,血清中都没有发现有准种现象,但在粪便中有准种现象。
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