为研究构建可直接降解纤维类资源生产燃料乙醇的酵母基因工程菌，本文以纤维素高效分解菌株绿色木霉（Trichoderma viride）AS3.3711为出发菌株。通过 RT-PCR的方法克隆出绿色木霉葡聚糖内切酶Ⅲ（EGⅢ）的cDNA基因，构建至克隆载体pMD18-T上转化大肠杆菌DH5α，同时对三种大肠杆菌DH5α、BL21、M15的感受态细胞的转化效率进行测试。对克隆出的cDNA序列经测序后构建到酿酒酵母诱导型表达载体pYES2上，用醋酸锂转化法转化酿酒酵母H158（Saccharomyces cerevisiae），转化获得的EGⅢ转化子经菌落PCR和质粒的双酶切鉴定。阳性转化子经2％的β-D-半乳糖诱导后，用Northern杂交、刚果红染色法和CMC糖化力法分别进行检测。　　实验结果表明，提取的绿色木霉RNA完整性较好，纯度较高。经RT-PCR法成功地扩增出了绿色木霉（T.viride）EGⅢ的cDNA基因并构建至了pMD18-T上。EGⅢ的cDNA基因经测序得到其开放阅读框长度为1254bp，编码418个氨基酸，推测蛋白质分子量为44.1kDa。采用同种方法制备的三种大肠杆菌感受态转化效率从高至低分别是：M151.5×109，DH5α2.3×108，BL211.5×103个转化子每μg pUC19质粒。本实验成功地将EGⅢ基因构建至了pYES2上并通过醋酸锂转化法得到了酵母转化子。本文对酵母转化子进行了DNA水平、RNA水平和蛋白水平三个层次的检测。酵母转化子的菌落PCR和质粒的限制性内切酶双酶切均验证了pYES2-EGⅢ重组质粒转入了酿酒酵母中；Northern杂交显示带有EGⅢ的酵母转化子在诱导培养下EGⅢ基因成功转录；刚果红染色显示，转化子可产生明显的水解圈，说明EGⅢ的自身信号肽能被酿酒酵母所识别，其蛋白能够分泌至胞外；CMC酶活检测显示该基因能在酿酒酵母中表达有生物活性的EGⅢ蛋白，经发酵培养发现酶活在培养60h达到最高0.041U/mL。