【摘 要】
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背景:蜡梅是蜡梅科蜡梅属植物,在我国分布广泛,十堰地区蜡梅花资源非常丰富,既往研究发现多种蜡梅属植物的提取物具有抗炎作用。目的:研究蜡梅花的抗炎作用及机制,为十堰地区蜡梅花资源的开发和利用提供科学依据。本研究使用十堰地区蜡梅花萃取所得精油进行抗炎实验,通过检测相关指标研究蜡梅花精油对致炎大鼠的保护作用及其作用机制。方法:(1)SPF级SD大鼠72只,随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组(阿司匹林
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背景:蜡梅是蜡梅科蜡梅属植物,在我国分布广泛,十堰地区蜡梅花资源非常丰富,既往研究发现多种蜡梅属植物的提取物具有抗炎作用。目的:研究蜡梅花的抗炎作用及机制,为十堰地区蜡梅花资源的开发和利用提供科学依据。本研究使用十堰地区蜡梅花萃取所得精油进行抗炎实验,通过检测相关指标研究蜡梅花精油对致炎大鼠的保护作用及其作用机制。方法:(1)SPF级SD大鼠72只,随机分为空白对照组、模型组、阳性对照组(阿司匹林200 mg/kg)、蜡梅花精油低、中、高浓度组。空白对照组和模型组给予蒸馏水灌胃处理,阳性对照组给予阿司匹林灌胃处理,蜡梅花精油低、中、高浓度组(0.1 g/kg、0.3 g/kg、0.8 g/kg)分别给予1%、3%、8%的蜡梅花精油10 m L/kg灌胃处理,每日1次。于实验第5天在灌胃后30 min,分别对各组大鼠右侧足跖皮下注射弗氏完全佐剂0.1 m L,空白对照组注射生理盐水0.1m L。观察并用排水法测量致炎前及致炎后1 h、2 h、3 h、5 h、24 h、2 d、3 d大鼠足趾体积,计算各组大鼠各时间点足趾肿胀率。之后对每组大鼠麻醉后心脏取血,并取脊髓腰段组织及足部肿胀组织用酶联免疫吸附法检测其中TNF-α、IL-1β等相关炎症因子的水平,Western Blot法检测NF-κB通路关键蛋白的含量。每组大鼠麻醉后进行灌流,取大鼠脊髓腰段及足部肿胀局部组织进行固定,石蜡包埋,制作病理切片,并用抗Iba1对脊髓组织中小胶质细胞进行荧光标记后,用共聚焦显微镜观察脊髓腰段组织中小胶质细胞的活化情况。(2)SPF级KM小鼠50只,随机分为模型组、阳性对照组(阿司匹林200 mg/kg)、蜡梅花精油低、中、高浓度组(0.1 g/kg、0.3 g/kg、0.8 g/kg)。模型组灌胃蒸馏水,阳性对照组给予阿司匹林灌胃处理,蜡梅花精油低、中、高浓度组分别给予1%、3%、8%的蜡梅花精油10 m L/kg灌胃处理,每日1次。于实验第7天在灌胃后30 min,取二甲苯20μL均匀涂抹在各组小鼠右侧耳廓,半小时后颈椎脱臼处死小鼠,用直径6mm打孔器分别打下各组小鼠的两侧圆耳片,用精密天平称量每只小鼠两侧圆耳片的质量,计算各组小鼠的耳肿胀率。结果:蜡梅花精油中、高浓度对弗氏完全佐剂致炎后1 h、2 h、3 h、5 h、24 h、2 d大鼠足趾肿胀有明显的抑制作用(P<0.05)。蜡梅花精油中、高浓度组能够明显减少血清中GM-CSF的含量(P0.05)。蜡梅花精油各浓度组脊髓组织中TNF-α、p-NF-κB p65明显减少,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。蜡梅花精油各浓度组足部肿胀组织中TNF-α的含量明显减少,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.01);其中、高浓度组足部肿胀组织中IL-1β的含量明显减少,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。蜡梅花精油高浓度组脊髓组织中小胶质细胞活化率明显降低,与模型组相比,差异有统计学意义(P<0.01)。蜡梅花精油各浓度组能不同程度的缓解足部肿胀组织中炎症细胞的浸润情况,并且其抗炎作用具有浓度依赖性。蜡梅花精油高浓度组对二甲苯致小鼠耳肿胀有明显的抑制作用(P<0.01),而低、中剂量作用不显著。结论:蜡梅花精油对弗氏完全佐剂致炎的大鼠具有明显的保护作用,其作用机制可能是通过NF-κB通路,下调TNF-α、IL-1β等蛋白的表达有关,但是对血液中TNF-α、IL-1β无明显影响;其高浓度组能明显减轻二甲苯所致的小鼠耳肿胀,但其抗炎作用弱于阿司匹林。
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