死海极端高盐环境放线菌资源初步研究

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本研究以死海极端高盐环境地区的土样为试验材料,探讨了不同土壤类型中放线菌的资源分布及不同处理对放线菌分离效果的影响;对该地区放线菌资源采用系统发育树分析进行筛选、归并;对筛选出的放线菌进行嗜盐耐盐生理特性研究,并采用多相分类方法对菌株进行鉴定。获得如下结果:1.选用GA、改良SCK、改良ISP5、CMKA4种培养基,设置15%、20%、25%、30%4个盐浓度,对经微波处理的4种类型土样进行分离,共获得70株不同的放线菌。其中,不同土样分离获得放线菌的种类数表现为1号土样>3号土样>4号土样>2号土样;不同培养基分离效果表现为:CMKA培养基分离高盐浓度下的放线菌效果最好,改良ISP5培养基分离的放线菌形态较特殊。以上结论对该试验研究的可行性及后续放线菌分离方法的设计具有重要的参考价值。2.采用物理方法(微波)、化学方法(加入孢子活化剂)、富集培养3种方法的组合共计9种方法对混合土样进行预处理,然后在3种盐浓度(15%,22.5%,30%)及3种培养基(ISP5、CMKA、HV)上进行分离,得到了分离死海高盐地区嗜盐耐盐放线菌最佳方法:土样经微波与化学孢子活化剂共同处理后,在22.5%复合盐的CMKA培养基上培养。3.对分离获得的78株菌进行基于16S rDNA单向序列的系统发育分析,初步判断:40株菌为拟诺卡氏菌属,4株菌为糖多孢菌属,3株菌为糖单胞菌属,1株菌为链单胞菌属,1株菌为拟无枝菌酸属,1株菌为海芽孢杆菌属,2株菌为喜盐芽孢杆菌属,2株菌为盐单胞菌属,23株菌为未知属。此外,通过系统发育树分析筛选归并得到23株不同的菌株。4.对23株放线菌选用复合盐、NaCl、KCl分别进行耐盐及嗜盐放线菌的划分,得出供试菌株对不同盐类型嗜盐耐盐程度不同。以复合盐进行耐盐及嗜盐放线菌的划分:有21株可以在25%以上盐浓度生长,其中有11株为极端嗜复合盐菌;以MgCl2进行耐盐及嗜盐放线菌的划分:有18株可以在25%以上盐浓度生长,其中有14株为极端嗜Mg盐菌;以NaCl进行耐盐及嗜盐放线菌的划分:有17株可以在25%以上盐浓度生长,其中有5株为极端嗜Na盐菌。此外,还获得1株极端专嗜Mg盐菌,1株极端专嗜Na盐菌,4株中等专嗜Na盐菌。5.对21株放线菌进行多相分类鉴定,其中2株菌确定为同种,9株菌鉴定到种,6株为潜在新种,3株为潜在新属,2株形态特殊未确定分类地位。
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