拟南芥叶扁平细胞突变体pld的表型鉴定和基因克隆

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在多细胞生物体的形成过程中,各种类型细胞的分化及形态建成是发育生物学的重要研究内容。在模式植物拟南芥中,叶表皮扁平细胞是研究细胞形态建成机制的理想模型。本实验室在前期的研究中,筛选鉴定到了一个叶扁平细胞发育异常的突变体tub4S95F,为了进一步寻找与TUB4在遗传上能直接相互作用调控叶扁平细胞形态建成的调控因子,我们将tub4S95F突变体进行EMS二次诱变。本研究从该二次诱变库中筛选分离获得了一个叶扁平细胞发育缺陷表型加剧的突变体685#。同时该突变体还表现出一系列其他生长发育缺陷的表型,包括植株矮小、侧枝数目增多、育性明显降低、主根长度变短、根毛长度和密度增加,下胚轴变短、变粗等。将其与Col进行回交后,在F2代群体中分离出了单突变体,命名为pld。与Col相比,pld突变体叶表皮扁平细胞边缘比较平滑,细胞凸起的数目明显减少,长度变短。分别利用TUA6-GFP和ACT-GFP标记微管和微丝,观察发现pld突变体叶扁平细胞中微管和微丝骨架的排列发生变化。利用图位克隆技术和全基因组测序分析,发现At4g37080基因编码序列的第145位碱基发生了C到T的替换,导致该基因翻译提前终止。At4g37080的T-DNA插入突变体中,叶表皮扁平细胞的表型类似于pld突变体,表明At4g37080是导致该突变体缺陷表型的基因。遗传分析结果显示,At4g37080与TUB4在调控拟南芥叶表皮扁平细胞的形态建成过程中是相互独立的。
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