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银杏(Ginkgo Biloba L.),又名公孙树,属裸子植物门(Gymnospemae),银杏科(Ginkgoaceae)银杏属(Ginkgo),单属单种,是原产于我国的一种古老的木本裸子植物。银杏是一种非常重要的经济林树种,具有极高的经济价值和研究价值。本研究从银杏不同生长发育时期叶片、茎端及花转录组数据库中筛选到两个可能与开花相关的基因GbCOL及GbMADS8,对其进行了克隆及功能分析。主要研究结果如下: 1、银杏GbCOL基因及GbMADS8基因的克隆及生物信息学分析。根据银杏不同时期叶片、茎端及花转录组数据库中该基因的ORF序列设计特异引物,以成年银杏叶片的cDNA为模板进行PCR扩增得到全长CDS序列,GbCOL全长CDS序列为1239bp,GbMADS8全长CDS序列为861bp;并利用在线软件对基因序列进行了生物信息学分析,结果表明:GbCOL基因和GbMADS8基因分别属于CO家族基因和MADS-box家族基因,其功能可能与开花相关。 2、GbCOL基因及GbMADS8基因的表达量分析。采用qPCR分析方法,分别对GbCOL基因在银杏4、5、9月成年树叶,和4、9月幼年树叶中GbCOL基因的表达量进行分析。结果表明:GbCOL基因在9月成年树叶中的表达量最高,其次是5月成年树叶、4月成年树叶、9月幼年树叶、4月幼年树叶。同时采用qPCR分析方法对GbMADS8基因在银杏4、5、9月成年茎端,和4、9月幼年茎端及花中GbMADS8基因的表达量进行分析。结果表明:GbMADS8基因在花中的表达量最高,其次是4月成年茎端、5月成年茎端、9月成年茎端、4月幼年茎端、9月幼年茎端。 3、银杏GbCOL基因的原核表达。构建原核表达载体pET-32a(+)-GbCOL,利用IPTG诱导pET-32a(+)-GbCOL重组蛋白,表达出了一条大小约为45kDa的融合蛋白。 4、银杏GbCOL基因功能在拟南芥中的初步验证。构建植物超量表达载体pBI-121-GbCOL,重组转化农杆菌菌株GV3101,采用花序浸染法转化拟南芥花序,收获种子后,通过抗性培养筛选阳性植株,自交繁殖2代后获得T2代转GbCOL基因植株。