目的：
　　本课题旨在以本课题组前期研究为基础，参照以往文献报道建立大鼠骨癌痛动物模型，选用蟾灵膏干预，研究该方对NF-κB信号通路及相关因子NF-κBp65、IKKβ、IκBa、TNF-a、IL-1β、IL-6蛋白表达水平及NF-κBp65、IKKβ、IκBa磷酸化的活性影响情况，进--步研究其对骨癌痛的作用机制。
　　方法：
　　本实验共用大鼠70只，Wistar普通雌性Wistar大鼠10只(体重60-80g，4周龄)，雌性大鼠10只用来腹腔注射含有Walker256的腹水瘤实验，普通雄性Wistar大鼠60只(体重150-160g,5周龄)，60只雄性大鼠用来制作骨癌痛的造模实验。随机将老鼠分为6组，造模后60只用来进行试验。通过对模型大鼠自发性疼痛的研究，以及大鼠体重、后肢机械性痛和热痛觉过敏、X片、病理切片对模型进行全面评估。造模成功后将大鼠随机分成假手术组(胫骨钻孔注射生理盐水)、模型组(胫骨钻孔注射癌细胞)、蟾灵膏高剂量组(CLGH)、蟾灵膏中剂量组(CLGM)、蟾灵膏低剂量组(CLGL)、阳性组。本实验用药组的用药量，是按照动物药理实验与方法折算，并参考本课题组前期实验用药量及普通成年人常规用量计算得出，则大鼠的推荐剂量约为2g(生药)/kg(体质量)/只(20mg/10g)，推荐剂量做为最低剂量，中剂量组为每天4000mngkg(40mg/10g),高剂量组为每天8000mg/kg(80mg/10g)。造模成功后21天开始药物治疗。假手术组和模型组:0.9％生理盐水2ml/次，每天2次:两次间隔＞8h,蟾灵膏高、中、低剂量组分别给予80mg/10g.40mng/10g.20mg/10g(分别配备成2mL溶液)灌胃，每天共2次，阳性组给予盐酸曲马多按照20mg/kg,2ml/次，每天共2次，两次时间间隔＞8h,连续给药7天。灌胃时间分别于上午9:00到10:00期间以及下午17:00到18:00之间。在灌胃期间，大鼠可以自由饮水、进食，每天观察各组大鼠一般状况，包括大鼠的皮毛色泽、走路姿势、精神状态、食欲、大便情况等。同时，在造模后第0，7,14,21和28天测量大鼠体重，同时，使用冷热板和电子测痛仪测量每组大鼠的热痛阈值和机械疼痛阈值。造模后第14到21天之间对大鼠侧后肢进行x线片拍摄。在连续给药1周后进行取材，并且在取材前将大鼠禁食24小时。通过从腹主动脉采血获得大鼠血液并离心以获得血清。大鼠颈脱位处死后，用4％多聚甲醛保存大鼠后肢胫骨。同时快速提取大鼠L4-5脊髓，并将大鼠脊髓分为两部分保留，一部分保存于4％多聚甲醛，一部分保留于-80℃冰箱，用于各指标检测;取胫骨病理组织切片观察骨破坏情况。采用ELISA检测血清中TNF-a、IL-Iβ、IL-6的表达量;免疫组织化学法检测脊髓TNF-a,IL-1β和IL-6的表达水平。Western Blot检测大鼠脊髓NF-kBp65，IKKβ,IkBa蛋白和蛋白磷酸化的表达。
　　结果：
　　1.行为学实验结果显示:与假手术组相比，模型组大鼠的热痛阈值和机械痛阈值在实验过程中显著降低(P＜0.05)，与模型组比较，蟾灵膏高、中剂量组和阳性组可以提高大鼠骨癌痛模型引起冷热板疼痛阈值和机械疼痛阈值(P＜0.05)。
　　2.ELISA结果显示:蟾灵膏可以有效降低TNF-a(P＜0.05)、IL-1β(P＜0.05)和IL-6(P＜0.05)的表达量，减轻了大鼠的疼痛，抑制了神经性疼痛的发展。
　　3.免疫组化结果显示:蟾灵膏可以抑制模型组大鼠脊髓中TNF-a、IL-1β和IL-6的表达。
　　4.Western blot结果显示:蟾灵膏可以显著下调模型组大鼠脊髓中p-IKKβ(P＜0.05)、p-IκBa(P＜0.05)、p-p65NF-KB(P＜0.05)的蛋白表达，同时显著上调IkBa(P＜0.05)的蛋白表达，但对IKKβ和NF-κBp65的蛋白表达无影响。
　　结论：
　　1.胫骨接种Walker256乳腺癌细胞的大鼠表现出一系列疼痛表现，表明大鼠骨癌痛模型成功。
　　2.蟾灵膏可以改善骨癌痛大鼠的冷热板疼痛阈值和机械痛疼痛阈值。
　　3.癌性疼痛发生时，大鼠血清和脊髓中TNF-a,IL-1β和IL-6等一系列炎症因子的表达增加，表明炎症因子参与癌性疼痛的发生。蟾灵膏可以抑制炎性因子TNF-a、IL-1β、IL-6的表达，进而达到止痛的作用。
　　4.蟾灵膏对大鼠骨癌痛具有显著的镇痛作用。其可以抑制骨癌痛大鼠脊髓背角p-IKKβ、p-IkBa、p-p65NF-KB蛋白的表达，可以明显缓解IkBa蛋白的降解。
　　其机制可能与抑制NF-KB信号通路有关，其涉及炎症因子的参与。