【摘 要】
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黄瓜在我国蔬菜周年供应上占有重要地位,但易受多种病害而使产量降低,品质下降。传统的育种方法周期长,效率低,且黄瓜具有严重的有性杂交不亲和障碍,用传统的育种方法很难得到具有
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黄瓜在我国蔬菜周年供应上占有重要地位,但易受多种病害而使产量降低,品质下降。传统的育种方法周期长,效率低,且黄瓜具有严重的有性杂交不亲和障碍,用传统的育种方法很难得到具有抗性的优良品种。 本实验以S05,S06黄瓜子叶为外植体,利用农杆菌介导法将荧光素基因(luc)和ATT1基因(编码合成角质层所需的细胞色素P450氧化酶,使角质层增厚)导入黄瓜,建立了高效稳定的植株再生体系和遗传转化体系。探讨了影响遗传转化频率的主要因素,获得了阳性转基因植株。主要结果如下: 1 诱导培养基内添加AgNO3和ABA可使外植体直接再生出不定芽,提高了再生频率和每外植体再生芽数。筛选出的最佳诱导培养基分别为: S05 BA2.0mg/L+ABA1.0mg/L+AgNO32.0mg/L,再生频率为81.6%; S06 BA1.5mg/L+ABA0.5mg/L+AgNO32.0mg/L,再生频率为91.2%。 2 头孢霉素促进芽的再生,而羧卞青霉素有抑制作用。抑菌抗生素选用Cef400mg/L。 3 黄瓜遗传转化的最适宜条件S05:子叶预培养2d,侵染15min,共培养3d。S06:子叶预培养1d,侵染20min,共培养3d。 4 转基因植株的检测 分别用特异引物对T0代再生植株进行PCR检测,结果分别获得了20株S05和14株S06转Luc基因阳性植株,3株S05和6株S06转ATT1基因阳性植株。PCR检测结果可初步证明目的基因已整合到黄瓜基因组中。
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