GPR34在非小细胞肺癌中的表达及其生物学作用的研究

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目的:探讨利用生物信息学方法分析GPR34基因和蛋白在非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)组织及正常肺组织中的差异表达,预测分析GPR34与NSCLC预后的关系;探讨利用生物学实验分析NSCLC GPR34基因表达情况,分析GPR34与NSCLC的相关性;探讨利用基因过表达技术研究NSCLC差异表达基因GPR34对NSCLC细胞增殖、侵袭和迁移的影响。方法:1.联合应用Oncomine、TCGA、HPA数据库分析GPR34基因和蛋白分别在正常肺组织及NSCLC肿瘤组织中的表达差异。同时,应用Kaplan-Meier数据库生存模型预测分析GPR34基因表达与NSCLC患者预后的关系。2.通过实时荧光定量聚合酶链式反应(qRT-PCR)技术检测70例NSCLC肿瘤组织及其配对的癌旁正常组织中GPR34的表达水平,比较癌组织和正常组织之间GPR34的表达差异,采用2-ΔΔCT法分析GPR34的相对表达倍数,并分析肿瘤组织中GPR34表达水平与临床病理特征之间的关系。3.通过免疫组织化学技术(Immunohistochemistry,IHC)检测70例NSCLC肿瘤组织及癌旁正常组织石蜡切片标本中GPR34、Ki67蛋白表达,分析GPR34、Ki67蛋白表达与临床病理特征之间的关系,并分析GPR34与Ki67蛋白表达的相关性。4.通过qRT-PCR和Western blot技术检测多种NSCLC细胞系中GPR34基因和蛋白表达水平。5.针对GPR34基因设计GPR34过表达载体,转染肺腺癌A549细胞系,使用qRT-PCR检测GPR34 mRNA表达;通过CCK8和Transwell法分别检测细胞增殖、侵袭和迁移。结果:1、联合多个数据库初步表明GPR34基因和蛋白在NSCLC肿瘤组织中下调表达,且其低表达与NSCLC患者(特别是腺癌患者)不良预后密切相关。2、NSCLC肿瘤组织中GPR34 mRNA表达水平为正常肺组织的0.46+0.24倍,显著低于正常肺组织,且GPR34的下调表达与肿瘤分化程度相关。3、GPR34蛋白在正常肺组织高表达,而在NSCLC肿瘤组织低表达,且其表达与肿瘤分化程度显著相关;Ki67蛋白在NSCLC肿瘤组织高表达,且其表达与分化程度显著相关;GPR34与Ki67在NSCLC肿瘤组织中的表达呈一定程度的负相关。4、qRT-PCR和Western blot结果表明,GPR34基因和蛋白在多种NSCLC细胞系中表达下调。5、GPR34特异性过表达载体转染A549细胞后,qRT-PCR检测证实GPR34基因明显高表达;GPR34基因过表达使A549细胞增殖、侵袭和迁移能力减弱。结论:1、探讨性应用生物信息学方法分析NSCLC GPR34基因表达,GPR34在NSCLC中下调表达。2、首次证实GPR34是NSCLC相关基因,其下调表达与NSCLC分化程度、不良预后密切相关。3、GPR34特异性过表达载体转染肺腺癌A549细胞可有效促进GPR34基因表达;GPR34基因过表达后抑制A549细胞增殖、侵袭和迁移。
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