目的:本研究旨在探讨加味清肺泻肝汤是否能通过调控AMPK/CRTC2信号通路改善HepG2细胞胰岛素抵抗,并探讨加味清肺泻肝汤发挥作用的机理机制。方法:1.MTT法检测50～800 μg/mL加味清肺泻肝汤对HepG2细胞活性的影响。2.高葡萄糖DMEM培养基和10-3～10-7mol/L胰岛素联合建立体外HepG2细胞胰岛素抵抗模型(HepG2-IR),葡萄糖氧化酶法(GOD-POD法)检测上清液中葡萄糖含量,选择最佳模型制备条件。3.实验分为正常(Control)组,胰岛素抵抗模型(Model:HepG2-IR)组,罗格列酮对照药(RGZ20μg/mL)组,加味清肺泻肝汤低剂量(QF-100μg/mL)组,加味清肺泻肝汤中剂量(QF-200μg/mL)组和加味清肺泻肝汤高剂量(QF-400μg/mL)组,除正常组外模型制备后,对照药组、加味清肺泻肝汤低剂量组、中剂量组和高剂量组分别使用对应药物给药24小时,并用GOD-POD法分别检测各个组上清液中葡萄糖含量。4.蛋白印迹法(western blotting)检测各个组AMPKα,p-AMPKα,CRTC2,p-CRTC2蛋白含量的表达。5.采用反转录聚合酶链式反应(RT-PCR)检测各个组AMPKα,CRTC2,PEPCK,G6pase在RNA上的调控作用。结果:MTT实验:50～800 μg/mL加味清肺泻肝汤细胞增殖活力与空白组比较无明显统计学差异(P>0.05);HepG2-IR模型制备:高葡萄糖DMEM培养基与10-7mol/L胰岛素联合诱导24小时葡萄糖生成量显著升高(P<0.01);给药后GOD-POD检测:可见罗格列酮对照药组、加味清肺泻肝汤中剂量和高剂量组测得的上清液葡萄含量明显低于模型组(P<0.01);WB结果表明罗格列酮对照药组、加味清肺泻肝汤中剂量和高剂量组p-AMPKα和p-CRTC2蛋白表达高于模型组(P<0.01);RT-PCR实验:罗格列酮对照药组、加味清肺泻肝汤中剂量和高剂量组PEPCK和G6pase RNA表达低于模型组(P<0.01)。结论:加味清肺泻肝汤具有减少HepG2细胞葡萄糖生成量的作用;加味清肺泻肝汤改善HepG2细胞胰岛素抵抗可能是通过调控p-AMPKα和p-CRTC2蛋白的表达,抑制下游PEPCK和G6pase的RNA转录,从而减少葡萄糖输出的调节机制来实现的。