NO是一种人体内重要的炎症因子,诱导型一氧化氮合酶（iNOS）主要负责炎症中NO的合成和释放,在许多急、慢性炎症疾病如类风湿性关节炎、感染性休克、器官移植排异反应等中均存在iNOS过量表达NO的现象,因此,研究和开发具有高效抑制iNOS的小分子抑制剂可以为上述疾病的治疗带来新的希望。根据文献的报道和课题组前期的实验研究,我们确定吡唑并[4,3-d]嘧啶母核是一种有活性的药用小分子骨架结构,我们主要对吡唑并[4,3-d]嘧啶母核的C5和C7位置进行改造,得到A,B,C和D四个系列的吡唑并[4,3-d]嘧啶结构衍生物,所有化合物的结构均经过¹H-NMR,¹³C-NMR和HR-MS确证。首先我们在C5位用3,4,5-三甲氧基苯基与母核结构相连接,然后在C7位进行不同芳香胺类,脂肪胺类等取代得到A系列化合物,根据其NO释放抑制实验结果发现,A系列化合物普遍具有较低的NO释放抑制活性。然后我们分别用苯乙烯基、2-呋喃乙烯基和3,4,5-三甲氧基苯乙烯基对母核C5位进行改造,分别得到B,C,D系列化合物,构效关系分析发现,通过引入乙烯基增加母核C5位取代基与吡唑并[4,3-d]嘧啶母核距离加强了化合物的抗炎活性,对其进行NO释放抑制活性实验得到了本系列活性最好的化合物D27。通过体外酶活性抑制实验,我们验证了化合物对NO释放抑制作用与其对iNOS酶活性的抑制作用呈正相关,表明吡唑并[4,3-d]嘧啶结构衍生物是通过对iNOS酶活性的抑制发挥其抗炎作用。然后从化合物D27对细胞内iNOS表达的影响实验结果表明,吡唑并[4,3-d]嘧啶结构衍生物并不影响细胞内iNOS蛋白的表达,而是通过抑制iNOS活性二聚体的形成发挥抑制NO合成和释放。最后,我们采用佐剂型关节炎大鼠模型验证吡唑并[4,3-d]嘧啶结构衍生物的体内抗炎活性,从大鼠足肿胀、体重减轻程度、血清中相关炎症因子变化和关节组织切片HE染色结果表明,吡唑并[4,3-d]嘧啶结构衍生物具有良好的体内抗炎活性。本研究通过NO释放抑制实验筛选出抑制活性最好的化合物D27,并通过一系列实验验证了其抗炎活性,为我们接下来对吡唑并[4,3-d]嘧啶结构的研究提供了改造思路,D27可以作为苗头化合物指导化合物的下一步改造,为设计和合成出更高效的iNOS小分子抑制剂奠定了基础。