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目的：对肠道病毒71型(EV71)的BrCr株进行细胞培养，从细胞培养的EV71病毒中提取RNA，并扩增EV71的BrCr株衣壳蛋白VP1基因，用于构建原核表达载体PET28a/VP1，表达VP1重组蛋白。以VP1免疫产蛋母鸡，获得抗VP1的鸡免疫球蛋白Y(IgY)，并对其进行鉴定，用于手足口病预防和治疗的探索。
方法：培养EV71敏感的非洲绿猴肾细胞(Vero)，利用Vero细胞增殖肠道病毒EV71 BrCr株，提取病毒总RNA，利用RT-PCR扩增出VP1目的基因，目的基因插入克隆载体pGEM-T，提取重组质粒，经BamHI，EcoRI双酶切获得目的基因，插入原核表达载体pET-28a，重组子同时经BamHI，EcoRI双酶切和测序鉴定，转化入感受态工程菌E.coli BL21(DE3)，获得阳性重组工程菌，经IPTG诱导获得表达融合蛋白，试剂盒纯化蛋白，经SDS-PAGE和Western blotting鉴定后，用VP1蛋白免疫开产母鸡，收集鸡蛋，利用EGG stractTM IgY Purification System试剂盒提取卵黄抗体IgY，间接ELISA测滴度，SDS-PAGE和Western blotting验证其表达量和免疫活性。结果扩增出肠道病毒EV71 BrCr株衣壳蛋白VP1基因，获得了含重组表达质粒pET28a/VP1的阳性工程菌株，经IPTG诱导能高效表达VP1融合蛋白，VP1经SDS-PAGE和Western blotting鉴定后，在约38kD左右显示一特异条带，证明表达VP1成功，利用纯化后VP1蛋白免疫产蛋母鸡，提取的IgY经ELISA鉴定，其滴度为1：104， SDS-PAGE和Western blotting证实为抗VP1的特异性IgY。
结论：成功的从EV71 BrCr株扩增出VP1基因，构建了PET28a/VP1表达载体，获得高效表达融合蛋白，免疫产蛋母鸡后制备高效价抗VP1蛋白的特异性IgY，为手足口病的防治奠定了基础。