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背景和目的:肝癌是目前全球最常见的恶性肿瘤之一,其发病率在恶性肿瘤居中第五位,全世界每年新发现的肝癌患者达六十万例。其治疗困难,病死率高,临床上治疗手段繁多,但手术仍然是综合治疗的主导方式。对于晚期肝癌的患者,手术失去意义,而导致这一结果重要原因是肿瘤对周围组织的侵袭和肿瘤细胞的远处转移。研究表明,上皮-间质转化(epithelial-mesenchymal transition,EMT)能促进肝癌的侵袭和转移,而抑制EMT成为抑制肿瘤侵袭转移的新途径。西奥骨化醇(seocalcitol,EB1089)是一种新研制的维生素D类似物,研究表明其不但能够有效诱导肿瘤细胞凋亡,还可显著抑制肿瘤细胞的增殖,具有对机体血钙影响小的优势,若能通过实验证实EB1089通过抑制肿瘤细胞发生EMT来抑制其侵袭和迁移能力,将为西奥骨化醇应用于临床治疗恶性肿瘤提供实验基础及理论依据。本文通过研究EB1089对转化生长因子-β1(transforming growth factor-β1TGF-β1)诱导肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化的影响,为其抑制肝癌侵袭转移提供新的证据,并进一步探讨其抗肝癌作用的可能机制。方法:常规培养SMMC-7721细胞,用1nmol/L EB1089、10nmol/L EB1089、100nmol/L EB1089、1000nmol/L EB1089作用于SMMC-7721细胞6、12、24、48h,筛选出具有统计学意义的作用浓度和时间。根据浓度、时间筛选结果将SMMC-7721细胞分为4个处理组(1000nmol/L EB1089组、10ng/m LTGF-β1组、10ng/m LTGF-β1+1000nmol/LEB1089组和空白对照组),分别作用48h。用显微镜观察四个处理组细胞形态改变情况;采用RT-PCR检测处理组细胞上皮标志性蛋白E-cadherin的m RNA表达量差异、间质特征性蛋白N-cadherin、Vimentin的m RNA表达量差异;Western blot检测处理组细胞E-cadherin、N-cadherin及Vimentin蛋白表达差异;迁移实验和侵袭实验检测四个不同处理组SMMC-7721细胞侵袭能力和迁移能力。通过对处理组细胞形态变化和相关蛋白表达情况研究,明确EB1089对TGF-β1诱导肝癌细胞发生EMT的影响。迁移和侵袭实验进一步明确EB1089对肝癌细胞生物学特性的调节作用。结果:1.1000nmo/L EB1089作用48h时,SMMC-7721细胞E-cadherin蛋白表达相对于对照组差异最为显著(P<0.05),为理想的作用浓度和时间。2.TGF-β1作用后SMMC-7721细胞由原来的不规则多边形变为长梭行,并伸出较多触角,EB1089能明显抑制这种形态变化。实时RT-PCR及Western blot显示:EB1089可有效抑制TGF-β1所致的E-cadherin m RNA和蛋白表达下降(P<0.05),同时降低N-cadherin、Vimentin m RNA表达水平和蛋白表达量(P<0.05);Transwell侵袭、迁移实验表明EB1089对TGF-β1诱导的细胞侵袭、迁移表现出抑制作用,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论1.EB1089对TGF-β1诱导的肝癌细胞SMMC-7721上皮-间质转化表现出有效的抑制作用。2.EB1089对肝癌细胞SMMC-7721侵袭、迁移能力发挥着有效的抑制作用。