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研究背景近些年来,由于人类生产生活中产生大量氟氯烃,并且这些化学气体都未经处理释放到空气之中,造成大气臭氧破坏加剧,大气层空洞变大,因此到达地面的紫外线增多,造成人类皮肤鳞癌的发病率增加。皮肤鳞癌的发病率在各种皮肤癌中位居第二,当前针对皮肤鳞癌的基础研究也很多,但皮肤鳞癌确切的发病机制尚不清楚。microRNA(miRNA)是近年发现的一类主要存在于胞质中的长度约为22个核苷酸的内源性非编码RNA,miRNA表达的改变已成为癌症相关功能障碍中的关键特征之一。研究发现miRNA主要参与调控细胞的增殖、分化和凋亡。肿瘤的发生发展受到多种miRNA的调控作用,同一种miRNA在不同的肿瘤中所发挥的作用可能完全不同。有研究发现miR-365可以抑制卵巢癌、胶质瘤、恶性黑色素瘤、结肠癌和非小细胞肺癌,而另有研究发现miR-365可以促进胃癌和胰腺癌的发生发展。我们的前期研究发现miR-365可以促进皮肤鳞癌的发展,这提示我们miR-365在皮肤鳞癌的发展过程中可能通过对上下游靶基因的调控来发挥促进癌症的作用。但是对miR-365促进皮肤鳞癌的发展机制尚不清楚,所以我们进一步对miR-365的下游靶基因进行探索。通过确定HOXA9在皮肤鳞癌中作为miR-365的靶基因,采用生物功能学实验以及检验HOXA9对皮肤鳞癌糖酵解影响来验证HOXA9在皮肤鳞癌进展中发挥的作用。实验方法①采用qPCR的方法检测miR-365和HOXA9在人正常皮肤细胞与皮肤鳞癌细胞系基因水平表达情况,采用Western Blot检测HOXA9在蛋白水平上的表达情况,IHC检测皮肤鳞癌组织中HOXA9蛋白表达水平并分析其与鳞癌分化程度之间的关系;②生物信息学预测miR-365的靶基因,并进行验证;③采用CCK-8实验检测沉默和过表达HOXA9后皮肤鳞癌HSC-1细胞的增殖能力变化;④采用Transwell实验检测沉默和过表达HOXA9后皮肤鳞癌HSC-1细胞迁移和侵袭能力变化;⑤采用流式细胞实验检测沉默和过表达HOXA9后皮肤鳞癌HSC-1细胞的凋亡变化;⑥采用Seahorse细胞外代谢检测系统检测沉默和过表达HOXA9后细胞代谢方式的改变。结果①相比于正常皮肤细胞,miR-365在皮肤鳞癌细胞中高表达(P<0.05),HOXA9在基因和蛋白水平低表达,HOXA9表达水平越低,皮肤鳞癌分化程度越低;②沉默HOXA9之后,人皮肤鳞癌HSC-1细胞增殖能力增强(P<0.001),过表达HOXA9之后,人皮肤鳞癌HSC-1细胞增殖能力降低(P<0.001);③沉默HOXA9之后,人皮肤鳞癌HSC-1细胞迁移和侵袭能力增强(P<0.01),过表达HOXA9之后,人皮肤鳞癌HSC-1细胞迁移和侵袭能力降低(P<0.01);④沉默HOXA9后HSC-1细胞凋亡减少(P<0.05),过表达HOXA9后HSC-1细胞凋亡增加(P<0.05);⑤下调HOXA9后HSC-1细胞OCR减少,ECAR增加;上调HOXA9后HSC-1细胞OCR增加ECAR减少。结论HOXA9能够抑制人皮肤鳞状细胞癌的增殖、迁移和侵袭,促进其凋亡,通过调控糖酵解通路抑制皮肤鳞状细胞癌的发展。