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背景和目的:蚕豆嘧啶（divicine）是蚕豆中引起葡萄糖-6-磷酸脱氢酶（G6PD）缺乏症患者发生溶血的主要成分之一,其机制为消耗红细胞内谷胱甘肽（GSH）,导致红细胞发生氧化应激损伤,进而诱发溶血。目前对于divicine引起的氧化损伤研究多集中在红细胞。血管内皮细胞是衬于血管内表面的单层扁平上皮细胞,与血液直接接触,易受血液中各种理化因素的影响,从而参与了动脉粥样硬化等心脑血管疾病的发生发展。因此,G6PD缺乏患者在进食蚕豆后,蚕豆嘧啶进入血液循环,除了引起红细胞氧化损伤外,是否同时增加血管内皮细胞氧化应激压力,这方面的研究仍未见报道。本研究旨在通过体外细胞培养实验探讨divicine对人脐带静脉内皮细胞（HUVECs）的毒性作用及其可能机制,为G6PD缺乏症患者是否同样易于发生血管内皮氧化损伤提供实验依据。方法:（1）高效液相色谱法（HPLC）比较酸解法及酶解法制备divicine的效率。（2）CCK-8法检测不同浓度（0、18.5、28.1、47.1、85.1μM）divicine作用不同时间（6、12、24、48h）对HUVECs活性的影响。（3）不同浓度divicine作用HUVECs 24h后,倒置相差显微镜及透射电子显微镜进行形态学观察。（4）分光光度法测定不同浓度divicine作用24h对HUVECs中谷胱甘肽（GSH）含量的影响。（5）HUVECs经divicine作用24h后,2’,7’-二氯荧光黄双乙酸盐（DCFH-DA）标记细胞内活性氧（ROS）,流式细胞术检测HUVECs内ROS水平;高效液相色谱法检测丙二醛（MDA）含量。（6）HUVECs经divicine作用24h后,Annexin V-FITC/PI双染色法-流式细胞术检测HUVECs凋亡率;Calcein-AM荧光探针检测细胞内可变铁池（LIP）的变化。（7）不同浓度去铁胺（DFO）（25、50、100μM）对divicince引起的HUVECs损伤的抑制作用,检测指标包括细胞活性,细胞凋亡率,细胞内ROS、GSH、MDA、LIP,同时观察细胞形态学变化。结果:（1）酸解法HPLC未见divicine产物峰;酶解法反应底物vicine（x）在25-800μM浓度范围内与生成的产物divicine（y）浓度呈线性关系:y=0.3805x+9.0356（R2=0.9987）。（2）18.5、28.1、47.1、85.1μM divicine与HUVECs孵育6～48h,细胞活性降低,呈剂量及时间依赖性。28.1μM、47.1μM divicine作用12、24及48h,细胞活性显著降低,与相应的对照组比较有统计学差异（P<0.05）;85.1μM divicine作用6～48h细胞活性均显著降低（P<0.05）。（3）倒置相差显微镜下可见,对照组细胞贴壁生长,细胞呈多边形或短梭形,单层铺路石状镶嵌排列;18.5μM divicine作用24h细胞形态无明显变化;28.1～47.1μM divicine作用24h,细胞胞浆颗粒增多,细胞间隙增大,边界不甚清楚,但胞核仍较清楚;85.1μM divicine作用24h细胞变形明显,有部分细胞出现皱缩、部分细胞脱落。透视电子显微镜观察,对照组胞质均匀,可见内质网,含较多椭圆形或长梭形线粒体;线粒体内外膜光滑平坦,线粒体嵴长而密,彼此呈平行排列,且与线粒体长轴垂直;细胞核内外两层核膜和核孔均清晰可见;85.1μM divicine作用24h后,细胞质电子密度变低,细胞器空泡化;线粒体变圆,内外膜模糊,线粒体嵴减少或消失,双层核膜模糊不清。（4）18.5～85.1μM divicine作用24h,细胞GSH浓度分别为8.32±1.42、7.41±2.51、5.16±1.13、2.85±1.38μM/（g protein）;与对照组（11.64±3.71μM/（g protein））比较,18.5～85.1μM divicine作用24h显著降低细胞内GSH含量（P<0.05）,并呈剂量依赖性。（5）浓度为18.5～85.1μM divicine与HUVECs孵育24h,细胞内ROS平均荧光强度分别1.07±0.02、1.08±0.01、1.15±0.01、1.37±0.11;对照组平均荧光强度为1.00±0.02;47.1μM～85.1μM divicine作用24h可使细胞内ROS含量显著升高（P<0.05）。18.5～85.1μM divicine作用24h,细胞MDA浓度分别为0.32±0.07、0.34±0.02、0.39±0.06、0.53±0.08μM/g protein;与对照组（0.21±0.10μM/g protein）比较,28.1～85.1μM divicine作用24h细胞内MDA含量显著升高（P<0.05）,并呈剂量依赖性。（6）18.5～85.1μM divicine与HUVECs孵育24h,细胞凋亡率分别1.03±0.55%、1.20±0.20%、2.33±0.12%、3.40±0.24%;对照组凋亡率为0.63±0.21%;47.1μM～85.1μM divicine作用24h显著提高HUVECs凋亡率（P<0.05）;0～85.1μM divicine作用24h,细胞LIP水平分别为1.00±0.32、0.92±0.29、1.57±0.32、3.36±1.12、5.03±1.11。47.1、85.1μM divicine组细胞LIP含量显著高于对照组（P<0.05）。（7）25μM～100μM DFO作用24h,可抑制85.1μM divicine引起的内皮细胞活性降低,并呈剂量依赖性（P<0.05）;100μM DFO作用24h,可显著抑制divicine引起的内皮细胞凋亡（P<0.05）、降低细胞内ROS、MDA和LIP含量（P<0.05）,但对GSH水平无显著影响。倒置相差显微镜下可见DFO干预后85.1μM divicine组贴壁细胞数显著增加。透射电子显微镜观察可见DFO干预后细胞核膜双层较清晰,但胞内仍有较多空泡。结论:Divicine可引起人脐带静脉内皮细胞氧化损伤,铁螯合剂DFO可显著抑制divicine引起的细胞损伤,提示divicine诱导的内皮细胞损伤与铁依赖性的脂质过氧化有关。