研究背景及目的自然流产(Spontaneous abortion,SA)是妊娠常见并发症,按自然流产发展的不同阶段,可分为先兆流产、难免流产、不全流产、完全流产。对自然流产患者及时有效的治疗,可进一步影响妊娠结局。故自然流产预防及治疗所展开的研究具有一定的社会意义。清代医家张锡纯在《医学衷中参西录》创立的寿胎丸方现广泛用于自然流产的防治。前期实验研究发现寿胎丸含药血清呈剂量依赖性地增强自然流产患者滋养层细胞的增殖活性、侵袭迁移力,减少细胞凋亡。基于此,本课题探讨寿胎丸含药血清对自然流产患者滋养层细胞凋亡及凋亡蛋白Bcl-2、Bax、Fas、FasL、Survivin表达的影响,以期进一步探讨寿胎丸防治自然流产作用机制及其作用靶点。研究方法1、将36只SPF级雌性SD大鼠随机分为3组,分别予寿胎丸水煎液(6.25g/kg)、地屈孕酮水溶液(2.08 mg/kg)、等量生理盐水灌胃,制备寿胎丸含药血清、地屈孕酮含药血清及空白血清。2、体外分离培养正常妊娠人工流产者及难免流产患者滋养层细胞(Trophoblastic cells,TB),采用免疫细胞化学法检测贴壁细胞中细胞角蛋白(Cytokeratin-7,CK-7)和波形蛋白(Vimentin)表达,证实为滋养层细胞后进行后续实验。3、不同浓度(5%、10%、20%)寿胎丸含药血清干预自然流产患者滋养层细胞,空白血清及地屈孕酮含药血清分别作为空白对照及阳性对照。4、采用流式细胞术(Flow cytometry,FCM)检测各组滋养层细胞凋亡情况。5、采用蛋白质免疫印迹法(Western blot)检测各组凋亡相关蛋白Bcl-2、Bax、Fas、FasL、Survivin表达的差异并分析其相关性。6、统计学方法:采用SPSS20.0统计学软件进行分析,计量资料以(x±s)表示。根据实验设计的不同采用不同统计方法,以P<0.05为差异有统计学意义。研究结果1、与正常对照组比较,自然流产患者滋养层细胞早期凋亡、总凋亡比例明显升高(P<0.05)。2、与正常对照组相比,自然流产患者滋养层细胞Bcl-2、Survivin蛋白表达量减少,Fas、FasL、Bax蛋白表达量增多(P<0.01)。3、与空白血清对照组相比,寿胎丸含药血清、地屈孕酮含药血清能降低自然流产患者滋养层细胞早期凋亡、总凋亡比例(p<0.01)。4、与空白血清对照组相比,寿胎丸含药血清、地屈孕酮含药血清能上调Bcl-2、Survivin蛋白水平,下调Fas、FasL、Bax蛋白水平(P<0.01)。5、寿胎丸含药血清对自然流产患者滋养层细胞凋亡及凋亡蛋白的影响呈剂量依赖性(p<0.05)。6、Bcl-2与Survivin存在密切的正相关关系,Bax、Fas、FasL与Survivin存在密切的负相关关系(P<0.01)。结论寿胎丸含药血清呈剂量依赖性减少自然流产患者滋养层细胞凋亡,上调Bcl-2、Survivin蛋白,下调Fas、FasL、Bax蛋白,从内源性途径、外源性途径抑制滋养层细胞凋亡是寿胎丸防治自然流产可能作用机制之一。