鸡球虫病是危害养鸡业最严重的疾病之一,由球虫病造成的死亡和生产能力下降,给养鸡业带来巨大损失。目前,鸡球虫病的控制主要依赖于药物预防和治疗,由于球虫抗药性而导致的药物研发和使用费用巨大,以及在治疗过程中产生的药残等问题,使药物的使用受到限制。使用疫苗预防球虫病成为未来预防和控制球虫病的主要手段,目前利用基因工程技术开发球虫病疫苗已成为此病的研究热点,从而使球虫主要抗原性基因的研究显得尤为重要。本实验根据已发表的堆型艾美耳球虫(E. acervulina)3-1E基因序列设计引物,用反转录一聚合酶链式反应(Reverse-translation polymerase-chain reaction, RT-PCR)技术扩增出堆型艾美耳球虫上海株的3-1E基因,并进行序列测定。结果表明3-1E基因全长为513bp,含有一个开放阅读框架。与GenBank中登录的核苷酸序列进行比较,E. acervulina上海株3-1E与美国株、E. tenella GS株、E. acervulina QH株3-1E的cDNA的核苷酸同源性分别为100%、99.6%和99.2%,推导氨基酸同源性分别为100%、99.4%(第98位由缬氨酸变为异亮氨酸)和98.3%(第95位由苏氨酸变为异亮氨酸,第96位由精氨酸变为甘氨酸,第98位由缬氨酸变为异亮氨酸)。在克隆到堆型艾美耳球虫3-1E基因后,将此基因亚克隆至原核表达载体pET30a(+)中并转化到大肠杆菌BL21中,于37℃IPTG诱导培养获得表达,表达形式为融合蛋白。凝胶薄层灰度扫描显示表达的融合蛋白约占菌体蛋白的35%。SDS-PAGE和Western-blot分析显示,表达的3-1E融合蛋白分子量约为26Ku。利用镍离子亲和树脂进行纯化并免疫新西兰白兔,制备兔抗3-1E基因多克隆抗体。经琼脂扩散实验和Western-blot证明制备的多克隆抗体与3-1E融合蛋白具有良好的反应性。本实验成功克隆到堆型艾美耳球虫3-1E基因,并进行了原核表达,利用纯化的3-1E融合蛋白免疫兔制备了兔抗堆型艾美耳球虫3-1E基因多克隆抗体,为下一阶段3-1E基因生物学特性及其应用的研究打下了坚实基础。