磁场结合顺铂对肿瘤细胞K562杀伤效应机制的初步研究

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目的:研究稳恒磁场联合顺铂对K562细胞杀伤作用的机制;用免疫印迹(western blotting)检测磁场处理前后K562细胞Cyclin B1表达量的变化。方法:1.MTT法检测顺铂联合磁场对K562细胞(人红白血病细胞)活性的改变。2.磁场联合顺铂作用于K562细胞后,通过光学显微镜、原子力显微镜观察细胞形态的变化;流式细胞仪分析检测细胞周期分布的变化;单细胞凝胶电泳(SCGE)检测细胞DNA的损伤。3.用western blotting检测同步化K562细胞各周期时相中Cyclin B1的变化趋势;4.磁场处理K562细胞后,用western blotting检测Cyclin B1蛋白含量的变化。结果:1.K562细胞以1×10~5 cells/mL的细胞密度接种,MTT检测结果表明,磁场联合10μg/mL顺铂处理K562细胞12h后,细胞活性受到显著抑制。2.磁场联合10μg/mL顺铂处理K562细胞12h后,光学显微镜观察细胞形态发现,磁场联合顺铂组细胞碎片较多。原子力显微镜观察发现,磁场联合顺铂组细胞表面出现较大的孔洞。流式细胞仪检测细胞周期分布发现,磁场可将细胞阻滞于G2/M期;顺铂可将细胞阻滞于S期;顺铂联合磁场处理细胞12h后,大部分细胞被阻滞于S期。SCGE检测的结果表明,磁场协同顺铂作用于K562细胞可以增加细胞DNA的损伤。原子力显微镜观察磁场与顺铂共同作用于K562细胞后,其DNA的结构变化,发现联合处理组DNA交联及断裂均增加。3.用western blotting检测Cyclin B1蛋白的周期变化,结果表明,K562细胞Cyclin B1从S期初期开始表达,随后逐步升高,在G2/M期达到最高点,进入M期后迅速降低。4.磁场分别处理K562细胞12h、24h、36h后,用western blotting检测Cyclin B1含量变化,发现磁场处理组与对照组相比,Cyclin B1蛋白表达量没有显著变化。结论:1)磁场结合抗肿瘤药物(顺铂)在一定条件下对K562细胞有协同杀伤效应,主要表现在细胞形态受损、细胞周期分布改变与细胞DNA损伤增加。2)磁场分别处理K562细胞12h、24h、36h后,western blotting检测细胞Cyclin B1含量的变化,发现磁场处理组Cyclin B1表达量与对照相比无明显变化。
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