背景:慢性牙周炎是一种与微生物,宿主和环境有关的口腔感染性疾病。其主要病理特征是牙周组织的炎症和破坏。牙龈卟啉单胞菌是慢性牙周炎的优势菌。其细胞壁表面的组成成分脂多糖是主要的致病因素,可引起组织局部的免疫反应,刺激细胞释放大量炎症介质、蛋白酶以及活性氧,最终导致牙周组织的胶原降解和骨吸收。而牙周膜成纤维细胞在牙周膜中最多且最重要。不仅作为机械屏障参与防御,同时具有免疫调节作用,参与胶原纤维合成、吸收和基质形成。在牙龈卟啉单胞菌脂多糖的诱导下可分泌多种细胞因子参与炎症过程,并在牙周组织的更新和创伤修复过程中扮演着重要角色。血小板反应蛋白-1(TSP-1)是1971年Baenziger等从血小板ɑ颗粒中分离出来的一种450 k Da的糖蛋白。随后TSP-1被发现在多种细胞类型中分泌,例如内皮细胞,成纤维细胞,中性粒细胞,单核细胞和巨噬细胞等。TSP-1的研究方向主要聚集在抗肿瘤血管形成,在炎症免疫性疾病中TSP-1也发挥重要的作用。Gokyu于2014年首次在牙周炎中发现了TSP-1的表达,但尚不清楚TSP-1在牙周炎中的具体作用。目的:探究TSP-1在慢性牙周炎中的作用,特别是对于h PDLFs相关细胞因子的调节作用,以及可能涉及的信号通路。以阐明TSP-1促进慢性牙周炎的分子机制。方法:收集CP患者和牙周健康志愿者的GCF,经ELISA实验分析两组人龈沟液中TSP-1的蛋白水平。构建大鼠牙周炎模型,切取炎症牙龈组织,检测TSP-1蛋白和m RNA表达水平,同时检测IL-6,COX-2,MMP-2,MMP-9,RANKL/OPG的表达。以h PDLFs作为体外研究对象,分离培养h PDLFs并鉴定。用P.gingivalis LPS诱导活化细胞作为阳性对照。构建过表达TSP-1质粒的重组腺病毒,通过基因转染技术上调h PDLFs自身TSP-1表达水平,检测h PDLFs细胞IL-6,COX-2,MMP-2,MMP-9,RANKL/OPG的表达;随后,将r TSP-1直接添加至细胞培养液中来诱导h PDLFs,并检测外源性TSP-1对h PDLFs中上述细胞因子表达的调节。在此基础上通过anti-TSP-1来中和由P.gingivalis LPS活化h PDLFs细胞产生的TSP-1,观察下游细胞因子MMP-2,MMP-9,RANKL/OPG的表达变化。此外,添加r TSP-1和MAPK信号通路抑制剂至h PDLFs细胞,探究TSP-1介导的MAPK信号传导关系,检测MAPK信号通路相关蛋白的变化以及h PDLFs细胞MMP-2,MMP-9,RANKL/OPG的改变。结果:(1)TSP-1在CP患者GCF中表达明显升高。(2)TSP-1在大鼠牙周炎症组织中表达上调。同时,炎性介质(IL-6,COX-2)、基质降解相关蛋白(MMP-2,MMP-9)、骨质破坏相关指标(RANKL/OPG)表达也增加。(3)通过转染Ad-TSP-1-GFP内源性的改变TSP-1的表达或者外源性的r TSP-1刺激,均使h PDLFs细胞TSP-1高表达。促进h PDLFs细胞炎性介质(IL-6,COX-2)、基质降解相关蛋白(MMP-2,MMP-9)、骨质破坏相关指标(RANKL/OPG)表达。(4)TSP-1中和抗体anti-TSP-1降低了P.gingivalis LPS诱导的h PDLFs细胞TSP-1的表达,同时也抑制了h PDLFs基质降解相关蛋白(MMP-2,MMP-9)、骨质破坏相关指标(RANKL/OPG)表达。(5)外源性的r TSP-1通过活化h PDLFs中P38-MAPK信号通路调节下游因子表达。结论:本研究的实验结果显示,慢性牙周炎疾病进程中,感染细菌作为始动因子活化h PDLFs,使其高表达TSP-1,TSP-1继而作为炎性介质,进一步促进h PDLFs牙周炎相关细胞因子的释放。在宿主对细菌的应答作用中,TSP-1可能通过P38-MAPK信号通路的参与使得局部组织随着疾病进展进一步崩解破坏。此研究更加深入的理解了慢性牙周炎的发病机制,为慢性牙周炎的预防以及治疗提供新思路。