淀粉样β肽(amyloidβ,A（3）是阿尔茨海默病（Alzheimer’s disease, AD）发病过程中重要的影响因素,一定范围内的oAβ（oligomeric amyloid-β）的获得是研究Aβ在AD病理发生过程中方法学上的难点。本研究首次提出利用固定化的分子簇,获得Ap寡聚体（oligomeric amyloid-β,oAβ）,再通过色谱技术研究不同oAp相互作用蛋白的新方法。首先,以分子簇Asp和Asp12为例,通过控制偶联密度和pH,成功的将Ap单体通过分子簇Asp和Asp12固定在Sepharose CL-4B上,并分别形成了两种大小不同的oAβ,分别命名为Ap2和Aβ13。然后利用Aβ2-和Ap,3-Sepharose CL-4B,对12月龄和2月龄的正常小鼠脑蛋白进行吸附分离。.希望通过该方法,为oAβ的生理病理的研究提供有效研究手段。 实验结果表明： 1.实验考察了pH8-12及反应2-24 h对偶联分子簇Asp的影响。考虑偶联效率及为了避免分子簇间的相互作用,优化后的条件为：pH11,反应时间为3 h。 2.对连接臂的考察中,最终选择溴乙胺为中间介导分子固定Ap,其优化后的Aβ固定条件为：Ap两倍过量,在pH11.5,反应12 h。 3.利用硫磺素T检测发现, Aβ13的荧光强于Aβ2,而对照琼脂糖凝胶没有荧光,这说明固定化的方法有效, Aβ确实形成聚集体。 4.Aβ13和Ap2吸附材料均对小鼠脑蛋白有吸附。Aβ13和Ap2对12月龄小鼠脑蛋白的吸附量分别是2月龄的1.75倍和2.2倍,吸附总量不到总蛋白的1%。 5. SDS-PAGE凝胶电泳分析发现Aβ13和Ap2均表现出吸附选择性,但两种材料吸附的主要蛋白在一维图上看不出明显的差别。 6.Aβ13的相互作用蛋白进行2D-PAGE电泳分析发现,在2月龄和12月龄小鼠中,仅3种相互作用蛋白相同,且这3种蛋白在12月龄小鼠中的吸附量较高,其他蛋白均为差异蛋白。