【摘 要】
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目的:1.检测AML患者NEDD8的表达,分析其表达与临床特征及预后的关系,为寻找新的AML生物标志物提供参考。2.探索NEDD8在AML中的作用和机制,为研究AML的发病机制,发现新的治疗靶点提供理论依据。方法:1.将我院儿童血液肿瘤科收治的AML患者（32例）纳入实验组。根据诊疗标准分为初诊组及缓解组,初诊患者按危险度分为标危、中危及高危组。同期住院的非血液系统恶性疾病患者（20例）纳入对照组
【基金项目】
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国家自然科学基金（82060675）； 贵州省科技厅科技计划项目（黔科合基础2020-1-Y313）；
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目的:1.检测AML患者NEDD8的表达,分析其表达与临床特征及预后的关系,为寻找新的AML生物标志物提供参考。2.探索NEDD8在AML中的作用和机制,为研究AML的发病机制,发现新的治疗靶点提供理论依据。方法:1.将我院儿童血液肿瘤科收治的AML患者（32例）纳入实验组。根据诊疗标准分为初诊组及缓解组,初诊患者按危险度分为标危、中危及高危组。同期住院的非血液系统恶性疾病患者（20例）纳入对照组。收集临床资料并采集骨髓标本2m L。通过Western Blot检测NEDD8蛋白的表达,分析其表达与临床特征及预后的关系。2.利用NEDD8基因sh-RNA的慢病毒载体构建敲低NEDD8的AML细胞株（THP-1、MV4-11）,分为敲低NEDD8慢病毒组（sh-NEDD8组）和慢病毒空转对照组（sh-Control组）。通过CCK-8法检测细胞增殖,流式细胞术检测凋亡和细胞周期,RT-q PCR和Western Blot检测Cyclin D1、Cyclin E1、P21、P27的表达。结果:1.AML患者NEDD8的表达及意义1.1初诊组患者NEDD8蛋白表达明显高于缓解组及对照组（P＜0.05）,缓解组和对照组间无差异（P＞0.05）。1.2初诊组患者NEDD8蛋白表达与外周血白细胞计数、外周血幼稚细胞比例、基因突变、FAB分型（M4）相关（P＜0.05）,与性别、年龄、贫血程度、骨髓原始细胞比例、外周血血小板计数、乳酸脱氢酶、融合基因及染色体核型无关（P＞0.05）。1.3中/高危组患者NEDD8蛋白表达高于标危组及对照组（P＜0.05）,标危组与对照组间无差异（P＞0.05）。1.4 NEDD8蛋白表达与AML患者的不良预后相关,NEDD8蛋白高表达患者OS更低（P＜0.05）。2.NEDD8在AML中的作用及机制利用NEDD8基因sh-RNA的慢病毒构建稳定敲低NEDD8的AML细胞株（THP-1、MV4-11）后:2.1细胞增殖检测结果显示THP-1及MV4-11细胞的增殖能力低于对照组（P＜0.05）。2.2细胞凋亡检测结果显示THP-1及MV4-11细胞与对照组的凋亡率及Caspase-3蛋白表达无差异（P＞0.05）。2.3细胞周期检测结果显示（1）THP-1及MV4-11细胞G0/G1期比例高于对照组（P＜0.05）,S期比例低于对照组（P＜0.05）;（2）THP-1及MV4-11细胞Cyclin D1蛋白表达低于对照组（P＜0.05）,THP-1细胞中无Cyclin D1 m RNA表达,MV4-11细胞Cyclin D1 m RNA表达低于对照组（P＜0.05）;（3）THP-1及MV4-11细胞Cyclin E1 m RNA和蛋白表达均低于对照组（P＜0.05）;（4）THP-1及MV4-11细胞P21蛋白表达高于对照组（P＜0.05）,P21 m RNA表达低于对照组（P＜0.05）;（5）THP-1及MV4-11细胞P27蛋白表达高于对照组（P＜0.05）,THP-1细胞P27 m RNA表达与对照组无差异（P＞0.05）,MV4-11细胞P27 m RNA低于对照组（P＜0.05）。结论:1.AML患者NEDD8蛋白表达升高,其表达与AML是否缓解相关,初诊时NEDD8蛋白表达升高,缓解后NEDD8蛋白表达降低。AML患者NEDD8蛋白表达与患者外周血白细胞计数、外周血幼稚细胞比例、基因突变、FAB分型（M4）及危险度相关。NEDD8蛋白表达与AML患者的不良预后相关,NEDD8蛋白高表达患者OS更低。NEDD8可能是潜在的AML生物标志物。2.NEDD8促进AML细胞的细胞周期G1/S期转化和增殖。
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