猪圆环病毒2型(PCV2)是猪圆环病毒相关疾病(Porcine circovirus associated disease,PCVAD)的主要病原,感染后会引起断奶仔猪多系统衰竭综合征(Postweaning multisystemic wasting syndrome, PMWS)、猪皮炎肾病综合征(Porcine dermatitis and nephropathy syndrome, PDNS)、猪呼吸道疾病综合征(Porcine respiratory disease complex, PRDC)、生殖系统疾病和其他疾病。其在世界范围内广泛流行,引起养猪业巨大的经济损失。疫苗接种是预防PCV2感染的有效手段,而PCV2在猪群中多为亚临床感染,带有其他抗原表位的重组疫苗免疫猪群后,可通过血清学等方法有效区分自然感染和疫苗免疫,鉴定猪群是否产生有效的免疫应答。本研究构建出带有KT3标签的感染性克隆,拯救出重组活病毒,并初步研究其安全性和免疫原性。1.嵌合型猪圆环病毒1-2 KT3感染性克隆的构建本研究通过重叠延伸PCR,将KT3标签重组至PCV1-2的Cap蛋白C末端,构建出单拷贝质粒pBSK(+)-PCV1-2 KT3 Kpn I,并构建出单拷贝质粒T-PCV1-2 KT3 BstE Ⅱ、具有2个完整的PCV复制起始区的感染性克隆pBSK(+)-PCV1-2 KT3 EKS (EKS)以及具有1个完整的PCV复制起始区感染性克隆pBKS(+)-PCV1-2 KT3 PEK (PEK)。分别将EKS、PEK和环化DNA转染细胞,并将2个单拷贝质粒以共转染方式电转至细胞中。结果表明四种方法虽然拯救效率有差异,但均能拯救出PCV1-2KT3活病毒,病毒滴度能达到104.8-1050TCID50/mL。2.嵌合型PCV1-2KT3活病毒作为标签疫苗的初步研究应用本室构建的嵌合型PCVl-2 KT3活病毒与PCV1-2病毒接种PCV2抗原抗体阴性商品猪。将8头猪随机分成3组,第一组3头接种105.0TCID50/头 PCV1-2 KT3,第二组3头接种105.0TCID50/头PCV1-2,第三组2头为健康对照组。每周采集血液、鼻腔、直肠棉拭子,接种后49 d剖杀所有试验猪。研究结果表明嵌合型PCV1-2 KT3病毒在猪体内可以产生较高水平的荧光抗体和中和抗体,其诱导的抗KT3标签的抗体趋势与前二者相似。其在猪体内有限繁殖,并不会引起病理损伤。表明其具有良好的安全性和免疫原性,初步证明其作为标签疫苗应用的可行性。