黑色素瘤是一种恶性程度极高的皮肤癌,好发于多痣,具有家族遗传史,免疫功能低下的西方白种人群中。导致该病发作的因素主要包括UV辐射和家族遗传。患病早期主要通过手术移除病灶,预后良好。但发生迁移侵袭的晚期患者,发病迅速,平均生存时间为3-11个月^【1】。在黑色素瘤中BRAFV600E位点突变十分常见,导致RAS非依赖的MAPK信号通路持续活化,使细胞恶性增殖。Vemurafinib是临床治疗常用药物,但治疗数月后细胞耐药^【2】。我发现与对照组相比,耐药细胞中某些DUBs的活性明显下降,这其中包括A20。我们知道几乎所有的蛋白质需经过翻译后修饰（PTM）才能发挥作用,而去泛素化修饰对维持细胞内底物蛋白的动态平衡起着重要的调节作用。除了占主要调控作用的MAPK/ERK,PI3K/Akt信号通路外,还存在一些其他的信号通路,例如NF-κB。在黑色素瘤细胞中,将其抑制后,细胞增殖能力明显减弱。同时使用免疫治疗（CTLA-4或者PD-1）,能够加强免疫应答,然而免疫治疗仍然处于早期的发展阶段^【3】。JAK/STAT信号通路也参与黑色素瘤的发展^【4】。早期有报道称抑制STAT3,能够抑制vemurafenib耐药细胞的增殖^【5】。去年又发现STAG2、STAG3的缺失或者表达量下降,导致DUSP6活性下降,MAPK通路持续活化,黑色素瘤产生BRAFi耐药^【6】。从第一代化疗药物烷化剂的发现至今经历了20多年,治疗手段从单一用药到联合用药再到靶向治疗,治疗策略从手术切除到化学药物治疗再到免疫生物治疗,虽然明显提高了病人的生存率,但化疗药物耐受,免疫系统崩溃,副作用剧烈,复发迅速使黑色素瘤的治疗仍然任重道远^【7】。去泛素化酶在泛素-蛋白酶体系统中发挥去泛素化的作用,将泛素分子或者泛素链从底物移除。目前在人类细胞中已发现¹00多种DUBs,大致分为UCHs、USPs、OTUs、MJDs、JAMMs五个家族。有研究报道DUBs的表达异常或者基因突变会引起人类疾病,包括神经退行性疾病和肿瘤^【8】。但由于各家族内的DUBs结构相近,功能相似,所以很难筛选到特异性强的靶向药。我的研究结果揭示,在A375黑色素瘤细胞系中,广谱的去泛素化酶抑制剂PR-619能够在短时间内活化RAS非依赖的MAPK信号通路。Trametinib和PD-184352（MEK1/2抑制剂）能够抑制PR-619对MAPK的活化作用。PLX-4032（BRAFV600E抑制剂）能够抑制PR-619对MAPK的活化作用,但PLX-4720（Raf抑制剂）抑制效果明显减弱。在A375-PLX-4032（BRAFV600E特异性抑制剂）耐药细胞系中,某些去泛素化酶的活性明显受到抑制。A20与BRAF、CRAF瞬时共转实验证明,A20能够稳定BRAF、CRAF。综上,PR-619能够活化MAPK信号通路。PR-619抑制A20活性,进而调控RAF的去泛素化。这对恶性增殖黑色素瘤的临床治疗有着重要的指导意义。