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肺动脉高压是一种基于不同病因和发病机制的综合征。当肺动脉高压发生时,肺脉管系统的循环阻力逐渐增加,可能导致右心衰竭和死亡。肺动脉高压的病理特征包括肺血管平滑肌细胞的异常增殖和肺血管重构。缺氧是造成肺动脉高压的主要诱因。它会直接诱导肺动脉平滑肌细胞的收缩和增殖,最终结果导致肺血管重构。近年来的研究表明,长链非编码RNA在许多生物过程中起到关键性作用,其中包括细胞的增殖与凋亡以及心血管疾病的发生和发展。研究显示,长链非编码RNAANRIL能够促进血管平滑肌细胞增殖和动脉粥样斑块的形成。由此推测,ANRIL可能在肺动脉平滑肌细胞中表达,并发挥调控作用。本实验通过实时荧光定量PCR分析在常氧和缺氧条件下,人肺动脉平滑肌细胞中ANRIL的表达变化情况。设计小干扰RNA敲低ANRIL的表达水平,通过MTT法检测细胞活力。在敲低ANRIL的情况下,通过CCK-8检测法分析细胞的增殖情况,用Western blot检测增殖细胞核抗原PCNA蛋白在常氧和缺氧的细胞中表达的变化,细胞免疫荧光观察增殖相关蛋白KI-67的表达变化,进一步确定ANRIL对人肺动脉平滑肌细胞增殖的作用。通过流式细胞术分析ANRIL对人肺动脉平滑肌细胞周期的影响,探索ANRIL对人肺动脉平滑肌细胞周期的调控作用,并通过Western blot测定周期蛋白A、D、E的表达情况。分别在常氧和缺氧的情况下敲低ANRIL,通过细胞划痕实验观察人肺动脉平滑肌细胞迁移距离的变化,采用transwell实验检测人肺动脉平滑肌细胞迁移数量的变化,以探究ANRIL的沉默对缺氧诱导的人肺动脉平滑肌细胞迁移的作用。通过以上实验我们发现,ANRIL在人肺动脉平滑肌细胞中存在表达。当给予细胞缺氧造模处理后,ANRIL的表达量显著下调(P<0.01)。用小干扰RNA将ANRIL的表达敲低后,检测到细胞活力有所增加(P<0.01),说明ANRIL的表达量对人肺动脉平滑肌细胞有影响。此外,CCK-8实验显示,敲低ANRIL也促进了细胞的增殖情况(P<0.01),我们还检测到PCNA的表达有所增加(P<0.01),荧光显微镜观察到增殖相关蛋白KI-67的表达上调。接着我们检测了细胞周期的变化,发现ANRIL的沉默能够促进更多的人肺动脉平滑肌细胞向G2/M+S期转移,增加了 G2/M+S期细胞的百分比(P<0.05),进而加速了细胞周期进程。同时,周期蛋白A、D和E的表达也发生了变化,当ANRIL表达下调时,周期蛋白的表达量增加(周期蛋白A,P<0.01;周期蛋白D、E,P<0.001)。这进一步验证了 ANRIL对细胞周期的影响。同时,低表达的ANRIL使人肺动脉平滑肌细胞的迁移距离和迁移数目均有所增加(迁移距离,P<0.05;迁移数目,P<0.01)。本研究首次发现在缺氧时,ANRIL对人肺动脉平滑肌细胞周期有影响,并能调控人肺动脉平滑肌细胞的增殖和迁移,暗示ANRIL可能是人肺动脉平滑肌细胞的关键调节因子,并为今后发展基因靶向治疗缺氧性PAH提供了研究基础。