米曲霉FZ58β-葡萄糖苷酶固体发酵优化及酶学特性的研究

来源 :福建师范大学 | 被引量 : 13次 | 上传用户:sashiu
下载到本地 , 更方便阅读
声明 : 本文档内容版权归属内容提供方 , 如果您对本文有版权争议 , 可与客服联系进行内容授权或下架
论文部分内容阅读
对米曲霉(Aspergillus oryzae)FZ58B-葡萄糖苷酶固体发酵进行优化。通过单因素试验确定最适碳源为甘蔗渣,最适氮源为黄豆饼粉,发酵初始pH为6.5,固液比为1/3,初步确定固体发酵的培养基配方。通过Plackett-Burman试验设计,考察影响米曲霉固体发酵8个因素对产酶的影响,筛选到对产酶结果影响最显著的3个因素,即麸皮,水和FeSO4。通过Box-Behnken设计的响应面分析法对所筛选到的3个显著因素进行优化,并获得最佳水平。优化后最适的发酵培养基配方(g/L):MgSO40.5,K2HPO41,FeSO40.01,NaNO32,pH6.5,固形物m(麸皮):m(甘蔗渣):m(黄豆饼粉)=4:1.5:0.2,固液比为57:100。发酵条件优化结果:接种量为每5g固形物接种1mL的孢子悬液(浓度为5~7×106个/mL),发酵温度33℃,发酵时间5天。经优化,产酶水平从最初的1002.6U/g达到1401U/g,比优化前提高了39.7%,优化效果较显著。 采用硫酸铵分级沉淀、DEAE Sepharose Fast Flow离子交换柱层析与Sephacryl S-200分子筛柱层析等纯化步骤对该酶进行了纯化,纯化后酶的比活力为4125.72U/mg、纯化倍数为7.68、回收率为1.81%。SDS-PAGE电泳测定该蛋白分子量的大小为120.23kDa。 酶学特性研究表明:最适酶促反应温度为60℃,60℃以内酶促反应是相对稳定的;酶促反应最适pH为5.0;酶促反应在pH3~9稳定。以水杨苷、pNPG为底物分别进行酶的动力学研究,结果表明,两者的酶促反应都符合米氏方程,最大反应初速度Vm分别为0.21mg/mL/min,2500μmol/L/min,米氏常数Km分别为0.81mg/mL、1mmol/L,活化能(Ea)分别为60.80 kJ/mol、43.54kJ/mol。 金属离子对酶活力影响研究结果表明:在终浓度为0-2.5mmol/L时,K+、Li2+、Mg2+、Mn2+、Zn2+离子对酶促反应无影响,Hg2+对酶促反应起抑制作用,其抑制作用属于可逆过程,其抑制机理表现为混合型抑制(既影响酶的米氏常数Km值,又影响最大反应速度Vm值)。 有机溶剂对酶活性影响的研究结果表明:甲醇、乙醇、1.2-丙二醇、异丙醇等几种有机溶剂对于酶促反应的影响都是所测酶活随着反应体系中有机溶液浓度的增加而降低,它们的IC50(酶活力下降50%的抑制浓度)分别是11%、10%、11.3%、12.8%。
其他文献
树突状细胞(Dendritic cells,DCs)是机体最为重要的抗原提呈细胞(Antigen presenting cell,APC)。DCs对抗原的交叉提呈是指外源性抗原被DCs摄取和加工后,与MHCⅠ类分子结合形成C
学位
  广州市委、市政府把石门国家森林公园列为广州市今后重点建设发展的十大最美森林公园之一,如何把石门国家森林公园打造成广州市最美的森林公园,使之成为珠三角、广东省乃至
  森林是陆地生态系统的主体,有着丰富浩瀚的生物多样性和美学、人文等多重属性,是发展森林旅游的重要基础和载体。森林旅游以其独特的个性和魅力,受到人们的青睐,以不破坏环境
会议
  本文论述了云崖寺自然保护区森林资源、动物资源的基本情况,并对其生态效益,社会效益,经济效益做出评估,发现保护中存在的问题,然后提出合理保护和开发利用植物资源的建议。
食烷菌(Alcanivorax)是海洋环境中最为重要的石油烃降解菌之一。通过对食烷菌的多样性和地理分布特征的研究,期望揭示食烷菌在海洋环境中的生态分布和进化历史,在开展多样性分析
请下载后查看,本文暂不支持在线获取查看简介。 Please download to view, this article does not support online access to view profile.
  本文以我国西部城郊的麦积国家森林公园为例,从公园概况、发展现状、特点入手,分析了发展优势、存在的困难、不足与问题,进而提出了一系列有利于促进我国西部城郊国家森林公
会议
  森林景观是以森林公园为载体最基本单位,是建设森林公园、开展森林旅游业的主要物质基础。结合小陇山桃花沟景区特点,对其主要景点从建设、布局进行规划设计,为总体科学建设
振动信号广泛应用于土木工程,水利工程,机械工程,航天工程等结构、机械构件因地震、爆破冲击或设备自身运行、高速度等情况下的动力特性,以及结构、机械构件的健康监测。采集方式、采样频率、精度等在很大的程度上决定了数据的准确性。由于相关采集设备的研发和技术的提高,运用高品质的采集仪器,合理的采集设置,将会在很大程度上提高振动信号的准确采集。然而,在实验采集时,会因为各种原因导致数据存在误差,尤其是当电路复