黑暗链霉菌是重要的氨基糖苷类抗生素——安普霉素和妥布霉素的产生菌，为不断提高其发酵单位，采用常规育种手段进行选育，获得了高产菌株。为进一步提高产生菌的质量，拟采用现代基因工程技术，阻断不同组分的生物合成信息流，以期获得单组分工程菌。以敲除妥布霉素生物合成相关基因tobS1-tobC为目标，完成相关接合转移质粒的构建，并对接合转移体系进行初步研究。黑暗链霉菌出发菌株Ts-228，经自然分离、紫外诱变和耐自身代谢产物处理，琼脂块法初筛结合摇瓶发酵来筛选高产菌，获得了效价提高1.8倍的新菌株Tt-49。该菌株生长周期4天，传代稳定。种龄为18h左右，接种量10％。于50L罐上发酵绘制代谢曲线，按照该曲线图进行调控，发酵单位可稳定在5000u/mL以上，最高达5865u/mL。自然分离与诱变相结合，是黑暗链霉菌选育的有效途径。菌株经紫外诱变和耐受驯化，发酵单位显著提高，所得的高产菌株已用于工业化生产。溶氧是妥布霉素发酵生产中的重要调控因子。以质粒pBR322、pUC19和pIJ773为基础，构建出含四环素抗性基因的重组质粒pIJ791，为后续黑暗链霉菌相关基因的敲除提供了筛选标记。同时去除了质粒pIJ773上多余的SacI酶切位点，可作为基因替换的母质粒。利用PCR的方法，以黑暗链霉菌Tt-49基因组DNA为模板，扩增tobS1-tobC上游片段和下游片段作为同源交换臂，两端携带FRT重组臂的四环素抗性基因作为筛选标记，插入到质粒pKC1139中，构建接合转移质粒pKC1150。CaCl2法制备供体菌ET12567/pUZ8002/pKC1150。初步考察了将穿梭载体pKC1150导入黑暗链霉菌的适宜条件后，成功将pKC1150转入到黑暗链霉菌Tt-49中。为下一步阻断妥布霉素生物合成基因簇上tobC基因（编码2-脱氧青蟹肌醇合酶）和tobS1基因（编码2-脱氧-青蟹肌醇转氨酶）奠定了基础。