藏药波棱瓜子壳潜在毒性、抑菌活性和化学成分研究

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波棱瓜(Herpetospermum pedunculosum)是一年生的攀缘草本植物,广泛分布于中国,尼泊尔和印度的喜马拉雅山地区,生长在海拔2000-3500 m的路边和灌木丛中。波棱瓜的干燥成熟种子在藏语中称为“Chi Ji Mei Duo”,是中国的传统藏药。具有清热解毒的功效,被广泛用于治疗“赤巴”炎症(藏药三大疾病之一)。早期研究证实,波棱瓜具有抗肝炎,抗炎,抗疲劳等药理作用。波棱瓜种子和种皮的药理活性已有研究报道,然而目前尚无对波棱瓜子壳的活性和毒性研究。利用基于核磁共振氢谱的代谢组学方法探究了波棱瓜子壳醇提物对大鼠灌胃的毒性,结合肝脏的病理学切片以及大鼠血清生化指标,以肝脏的应激反应配合血清中的代谢物异常现象来讨论其对大鼠机体产生的刺激性。实验结果显示,在灌胃后给药组大鼠体重增长量较控制组呈现降低趋势,给药组大鼠的病理学切片较控制组大鼠的肝细胞损失有明显增加,血清中两项与肝损伤相关的指标在灌胃后出现上升趋势,两项与氧化应激相关的指标在灌胃后出现下降趋势,给药组大鼠血清与肝脏的代谢轮廓较控制组发生了改变,并且代谢轮廓的分离程度出现剂量依赖性。实验指出波棱瓜子壳醇提物对大鼠进行灌胃之后,对大鼠的能量代谢、氧化应激和氨基酸代谢造成了一定的紊乱,进而导致了一定程度的肝损伤。对波棱瓜子壳醇提物经行不同极性萃取后,对不同极性部位对六种受试菌的体外抗菌活性经行研究,结果发现在所有受试菌株中二氯甲烷和乙酸乙酯层的抑菌活性明显大于其它极性部位,波棱瓜子壳的不同部位提取物对于绿脓杆菌的抑制活性最好,二氯甲烷和乙酸乙酯层对绿脓杆菌的抑菌效果优于50ug/ml的奈替米星。根据MIC的结果可以看出,乙醇粗提物中,其最小的抑菌浓度是12.5mg/ml,乙酸乙酯部位最小的抑菌浓度是12.5mg/ml。采用天然产物化学的方法,对波棱瓜子壳醇提物的石油醚萃取物和乙酸乙酯萃取物经行分离,经过常压正相硅胶色谱,常压反相碳十八柱色谱,葡聚糖凝胶柱色谱,反复正相硅胶柱色谱和半制备HPLC高效液相色谱等手段,从石油醚萃取物和乙酸乙酯萃取物中分离得到八个化合物。通过对核磁谱图的结构推断和与参考文献的对比,八个化合物鉴定为1,3-二羟丙基十五烷酸酯(1),顺-5-十二碳烯酸(2),1-O-β-D-葡糖吡喃糖基-(2S,3R,4E,8Z)-2-[(2-羧基十六酰)酪胺-4,8-十八碳二烯基-1,3-二醇(3),正二十六烷(4),顺-9-二十碳烯酸(5),herpetolide A(6),(22E)-5a,8aEpidioxyergosta-6,22-dien-3b-ol(7),(22E)-5a,8a-Epidioxyergosta-6,9(11),22-trien-3b-ol(8)。
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