本研究利用温度筛选法,对采自河北、贵州等部分地区的202份土壤样品进行分离,得到73株野生型苏云金芽孢杆菌（Bacillus thuringiensis,Bt）菌株。晶体形态的镜检观察和SDS-PAGE分析表明,大部分菌株都能表达约130kDa和60kDa的杀虫晶体蛋白。利用vip3A基因通用引物Svip5/Svip3,对本实验室保存和新分离的171株Bt菌株进行PCR鉴定,结果显示,63株能够获得预期大小的PCR产物,分布率约为36.8%。PCR-RFLP结果显示881bp,255bp,186bp的片段,为vip3Aal类基因,说明vip3A基因极其保守,但是杀虫活性差异较大,其中菌株TF9和Bt16分别对甜菜夜蛾表现高度和中等活性。用全长PCR方法分别从Bt16和TF9中克隆出vip3A基因,GenBank登录号分别为EU332167和EU294496,Bt蛋白国际命名委员会正式命名为Vip3Aa27和Vip3Aa26。序列分析表明,vip3A-16基因和vip3A-TF9基因与已知vip3A基因的序列相似性分别为96.75%-99.75%和96.67%-99.58%。Vip3Aa27与已知Vip3A蛋白氨基酸序列相似性为97.34%-99.49%,Vip3Aa26与已知Vip3A蛋白氨基酸序列相似性为96.70%-99.11%。将vip3A-16基因和vip3A-TF9基因分别克隆于表达载体pQE30,获得了表达载体p30vip-16和p30vip-TF9,并转化E.coli M15,SDS-PAGE和Western Blot分析表明,IPTG诱导后均表达88.5kDa左右的Vip3A蛋白。蛋白可溶性分析表明,蛋白主要以包涵体形式存在,只有约10%可溶。生物测定结果表明,Vip3Aa27蛋白对粉纹夜蛾、甜菜夜蛾和棉铃虫三种重要的鳞翅目害虫初孵幼虫的LC₅₀值分别为0.125μg/mL,0.238μg/mL和9.238μg/mL,毒力较高。而Vip3Aa26蛋白仅对敏感昆虫粉纹夜蛾有活性,LC₅₀值为4.423μg/mL,对甜菜夜蛾和棉铃虫的抑制作用不明显。利用PCR方法检测vip1A/vip2A基因在野生型Bt菌株中的分布,进行基因片段的克隆和序列分析。结合cry1基因的PCR-RFLP鉴定体系,分析与vip1A/vip2A基因有联系的cry1类基因。结果表明,本实验室171株野生型Bt菌株中,共有20株菌株含有vip1A/vip2A基因,分布率为11.69%。Western Blot分析验证了这些基因在菌株中都进行了表达。成功克隆了菌株Bt16的vip1A/vip2A基因片段,命名为vip1A/vip1A2A-16,GenBank登录号为EU594327。cry1基因的PCR-RFLP鉴定结果表明,该20株均含有cry1Fa基因,说明vip1A/vip2A基因与cry1Fa可能具有某种联系。