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猪的病毒性疾病种类多、危害大，因此研发具有广谱抗病毒作用的猪干扰素制剂具有重大意义。为了在我国研制生物工程重组猪干扰素类制剂，防制猪病毒性传染病和进一步开展猪干扰素分子生物学研究，本文进行了猪α干扰素基因(PoIFNα)的克隆、表达及其重组蛋白抗猪瘟病毒的研究。 根据DDBJ／GenBank基因库中已登录的猪α干扰素基因序列，设计了含SphⅠ和HindⅢ酶切位点的一对引物，采取聚合酶链式反应(PCR)法，以猪基因组DNA为模板进行了PoIFNα克隆。PCR产物经纯化回收后，插入pGEM T-Easy Vector，经序列测定证实克隆了一新亚型猪α干扰素。从pGEM T-Easy／PoIFNαVector上将PoIFNα片段双酶切，插入pQE30表达载体，构建了重组表达质粒pQE30／PoIFNα。将pQE30／PoIFNα转化入大肠杆菌JM109，IPTG诱导表达，SDS-PAGE分析筛选出了高效表达rPoIFNα的菌株。随后采用Western-Blot鉴定了表达的rPoIFNα。rPoIFNα经部分纯化并充分复性后，用细胞病变抑制法测定rPoIFNα的抗滤泡性口炎病毒(VSV)活性。并进一步在PK-15细胞上进行抗猪瘟病毒(HCV)石门系(SM)强毒的试验。 结果表明，本研究克隆了一新亚型猪α干扰素的成熟肽基因序列，全长501bp，编码166个氨基酸和一个终止密码子组成的成熟多肽；与基因库中的PoIFNα比较，核苷酸同源性为97.8％，氨基酸同源性为94.6％，只有点置换，无插入或缺失变异。SDS-PAGE分析表明，构建的重组表达质粒pQE30／PoIFNα在大肠杆菌JM109中表达的rPoIFNα占菌体蛋白总量的20～26％。Western-Blot证实表达的rPoIFNαN’端含6个组氨酸标签，分子量20.7KDa。rPoIFNα经部分纯化后占菌体蛋白总量的80～90％，复性后对细胞无毒性，抗病毒活性最高达1×10~8IU／ml。并且，在PK-15细胞上用免疫荧光反应检测rPoIFNα抗SM效果显示10~3IU和10~5IU的rPoIFNα均能显著地抑制HCV-SM感染。本实验在国内首先进行了猪α干扰素基因的克隆、表达及抗猪瘟病毒的研究，为基因工程生产重组猪α干扰素奠定了基础。