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研究目的β淀粉样蛋白(amyloid beta-protein,Aβ)在阿尔茨海默病(Alzheimer’ disease, AD)的发生、发展中起着重要作用,它可引起神经细胞的能量代谢障碍,进而导致神经细胞凋亡和坏死。Aβ主要包含Aβ1-40和Aβ1-42两种形式,其中Aβ1-42是老年斑中最先沉淀并且最难溶解的淀粉样蛋白,Aβ1-42的细胞毒性尤其是Aβ1-42的致凋亡作用一直倍受研究者的关注。ATP敏感性钾离子通道(ATP-sensitive potassium channels, KATP)是由(Kir6.1/Kir6.2和SUR1/SUR2)两种不同的亚基,以1：1组合形成的异构八聚体,是一种偶联细胞电活动和细胞代谢的特殊通道,通道的功能状态在维持神经细胞线粒体膜电位、对抗氧化应激损伤以及抑制神经元凋亡中发挥重要的作用。前期实验证实：Aβ1-42作用胆碱能神经元24h后,KATP通道亚基Kir6.1及SUR2蛋白表达明显增高,而KATP通道开放剂二氮嗪预处理可完全逆转Aβ1-42作用胆碱能神经元24h后引起的KATP通道亚基Kir6.1及SUR2的表达增加。本研究主要从细胞电生理水平观察Aβ1-42对胆碱能神经元KATP通道电流的影响,并应用二氮嗪预处理神经元,观察经二氮嗪预处理后Aβ1-42对胆碱能神经元KATP通道电流的影响。研究方法1.原代培养出生24h内的乳鼠皮层和海马胆碱能神经元,应用细胞免疫组化鉴定胆碱能神经元。2.采用全细胞膜片钳记录技术记录Aβ1-42对单个胆碱能神经元KATP通道离子流的影响；并应用二氮嗪作用细胞,观察通道电流的变化情况。3.二氮嗪预处理神经元1h,再采用全细胞膜片钳记录技术观察Aβ1-42对二氮嗪预处理后的神经元KATP通道离子流的影响。研究结果1与对照组比较,给予Aβ1-42后胆碱能神经元外向电流显著减少(P<0.05),再给予ATP敏感性钾通道开放剂二氮嗪后此减小的外向电流无显著变化(P>0.05)。2二氮嗪预处理细胞1h后,给予Aβ1-42作用细胞,胆碱能神经元的外向电流无显著变化(P>0.05)。研究结论1Aβ1-42导致神经元KATP通道外向电流显著减少,且这种作用不能被ATP敏感性钾通道开放剂二氮嗪所逆转。2二氮嗪预处理细胞1h能够防止Aβ1-42所致神经元KATP通道电流的下降。研究意义通过全细胞膜片钳记录技术观察到Aβ1-42导致神经元KATP通道外向电流显著减少,而ATP敏感性钾通道开放剂二氮嗪预处理细胞1h能够防止Aβ1-42所致神经元KATP通道电流的下降。二氮嗪预处理的保护作用在维持细胞正常生理功能中发挥重要作用。通过对KATP通道开放剂二氮嗪发挥神经保护作用机制的研究,有利于进一步深入揭示阿尔茨海默病(AD)脑内胆碱能神经元丢失的病理机制,同时为研发防治AD的药物提供新的靶标。