【摘 要】
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生物防治是利用天然或转基因的生物、基因、基因产物来减弱病害影响或减少害虫数量的方法。为了可持续农业系统的发展,必须明智地使用与病虫害防治相结合的防治措施。在有害生物综合防治体系中,生物防治发挥着关键作用,能够最大限度的减少病虫害发生。今后生物防治可能会因其广泛有效的性质而替代无机化学品防治病虫害。农业中使用的大多数生物防治剂都来源于细菌。许多细菌都能防治植物病原体,本文主要研究芽孢杆菌属中的解淀粉
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生物防治是利用天然或转基因的生物、基因、基因产物来减弱病害影响或减少害虫数量的方法。为了可持续农业系统的发展,必须明智地使用与病虫害防治相结合的防治措施。在有害生物综合防治体系中,生物防治发挥着关键作用,能够最大限度的减少病虫害发生。今后生物防治可能会因其广泛有效的性质而替代无机化学品防治病虫害。农业中使用的大多数生物防治剂都来源于细菌。许多细菌都能防治植物病原体,本文主要研究芽孢杆菌属中的解淀粉芽孢杆菌属。解淀粉芽孢杆菌与枯草芽孢杆菌在生物防治上有许多共同特性。本文主要包括四部分,第一部分是分离、筛选与鉴定解淀粉芽孢杆菌,另两部分是利用其对潜在植物病原体产生的蛋白质产物的提取与分析,第四部分是对提取的蛋白质杀线虫活性进行分析。细菌的菌株分别从小麦的叶片、根和茎样本中分离得到。样品从中国武汉的不同地区采集。通过稀释培养法对菌株进行纹枯病的抗性评价,最终发现37株抗纹枯病的菌株,对其中25株抗性较强的菌株进行16s r DNA鉴定,22株属于芽孢杆菌属。木霉属是分布在世界范围的土传真菌,自从发现木霉属可以杀死植物病原菌立枯丝核菌控制植物病害之后,80多年来作为潜在的生物防治剂研究其生防潜能。将IAP20基因(抗凋亡基因)转入哈茨木霉中。转化后,根据不同的温度和紫外线处理对抗性进行评估。本文分别在35℃,45℃和55℃的温度下对哈茨木霉分别处理120分钟,60分钟和30分钟。处理过的培养皿在28℃培养。野生菌作为对照。分别在培养8h,16h和24h之后记录数据,但结果显示不同处理得真菌生长情况没有明显差异。将哈茨木霉分别进行30分钟,60分钟以及120分的钟紫外线处理,然后培养在28℃。8h、16h、24h和32h之后记录木霉的生长情况,野生型作为对照。实验处理后转基因木霉和野生木霉之间没有显著差异。通过重组技术建立c DNA文库,将源自板蓝根植物的基因整合到载体中,并转入目标寄主枯草芽孢杆菌WB800中。基于表型对单克隆进行筛选并进一步的评估。对筛选出的单克隆进行培养和纯化,并对其胞外和胞内蛋白进行抗菌实验,供试的细菌有水稻白叶枯病菌,水稻细菌性条斑病菌,青枯病菌R21-5菌株,果斑病菌,枯草芽孢杆菌168菌株,大肠杆菌DH5α菌株,溃疡病菌YCKYB1菌株。发现编号为205和505的蛋白产物从能够抑制水稻白叶枯病菌,水稻细菌性条斑病菌,青枯病菌R21-5菌株和溃疡病菌YCKYB1菌株的生长。编号205的菌株胞内蛋白能够抑制供试菌WB800、空载体、青枯病原菌R21-5、水稻白叶枯病菌,水稻细菌性条斑病菌、和溃疡病菌YCKYB1的生长。而205的胞外蛋白能够抑制R21-5和YCKYB1的生长。而205的胞外蛋白能够抑制R21-5和YCKYB1的生长。505的胞内蛋白只能抑制细菌R21-5的生长,而胞外蛋白能够抑制WB800、空载体、R21-5、水稻白叶枯病菌,水稻细菌性条斑病菌和YCKYB1。本文对来自c DNA文库的克隆进行了秀丽隐杆线虫的杀线虫活性测试。还进行了不同的生物测定,如“食物选择”和“致死”试验以检查克隆的效率。发现命名为177和205的克隆对线虫有效。
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