基于微流控液滴数字化显色分析的耐碳青霉烯细菌快速鉴定

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目的:研究期望借助微流控液滴数字化显色分析,实现耐碳青霉烯细菌定性和定量分析,为耐碳青霉烯细菌感染疾病提供快速精准的诊断信息。方法:研究设计并加工了一种具有平行液滴分析单元的微流控芯片,其特点在于利用注射器负压即可快速实现多个分析单元中基于液滴的大规模样品分散。实验首先优化了液滴发生条件以保证稳定可靠的细菌分散效果,继而使用质控大肠埃希氏菌菌株考察了液滴数字化显色分析对于耐碳青霉烯细菌的定性和定量检测效果,最后利用这种方法进行了批量临床样品检测。结果:实验优化了芯片结构和液滴化学组分,保证高效液滴发生和长时间稳定性。注射器负压驱动下可在3 min内完成基于液滴的细菌分散,六个平行单元生成液滴尺寸均符合正态性分布。利用质控大肠杆菌菌株确定的实验条件为:液滴尺寸30μm,刃天青终浓度400μmol·L-1和3.5小时孵育时间。该方法中有菌液滴与无菌液滴的荧光强度具有显著性区别(非参数秩和检验,p<0.01),动态检测范围为105-108 CFU·mL-1,检测相对标准偏差(CV)低于5%,其定量结果与平板计数法具有一致性(R2=0.99225)。在培养3.5小时条件下,4μg·mL-1美罗培南对碳青霉烯敏感菌的抑菌率大于85.11%,对耐药菌的抑菌率低于20.80%,提示该方法能够有效甄别碳青霉烯敏感与耐药细菌。对批量临床样本的分析结果显示,液滴数字化药敏分析方法与纸片扩散法的一致性达到95.83%。结论:研究发展了一种基于液滴微流控技术与刃天青显色反应的耐碳青霉烯细菌的快速检测方法,能够在3.5小时内甄别样品中细菌有无,并进行精准定量,以及基于精准定量的抗生素敏感性测试。该法具有平行化、集成化、微型化、操作简单、快速、精准定量的特点,因而有望为临床提供一种强有力的耐碳青霉烯细菌的快速检测方法。
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