【摘 要】
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背景:结直肠癌（CRC）是消化道最常见的肿瘤,其发生是一个多阶段、多步骤的复杂过程。目前在结直肠肿瘤的分子机制、诊断和治疗方面取得了重大进展,但结直肠肿瘤的5年生存率并没有明显改善。多项研究已经表明了泛素结合酶E2M与多种肿瘤的发生、发展密切相关,但泛素结合酶E2M在结直肠癌中的作用尚未有明确报道。因此探明其在结直肠癌中的作用,将有助于结直肠癌的诊治。目的:探讨UBE2M在结直肠癌组织和结直肠肿瘤
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背景:结直肠癌（CRC）是消化道最常见的肿瘤,其发生是一个多阶段、多步骤的复杂过程。目前在结直肠肿瘤的分子机制、诊断和治疗方面取得了重大进展,但结直肠肿瘤的5年生存率并没有明显改善。多项研究已经表明了泛素结合酶E2M与多种肿瘤的发生、发展密切相关,但泛素结合酶E2M在结直肠癌中的作用尚未有明确报道。因此探明其在结直肠癌中的作用,将有助于结直肠癌的诊治。目的:探讨UBE2M在结直肠癌组织和结直肠肿瘤细胞HCT116中的表达,UBE2M对HCT116细胞增殖、克隆、细胞周期的作用。最终为结直肠肿瘤寻找一个有效的诊断标记物及治疗靶点。方法:通过GEO及TCGA数据库来获取UBE2M在结直肠肿瘤组织中的表达水平、对患者预后的影响及与Kras G12D突变之间的关系。THPA在线数据库获取UBE2M在结直肠正常组织及结直肠癌患者中的免疫组化表达情况。sg RNA转染到HCT116细胞中后,蛋白印迹实验验证其转染效率,使用CCK-8来检测HCT116细胞的增殖能力;平板克隆实验检测HCT116细胞克隆能力;流式细胞仪检测HCT116细胞的细胞周期分布。结果:在线可视化生信分析软件TIMER中发现UBE2M基因在多种肿瘤中均呈现高表达,且具有统计学意义。UALCAN在线软件发现结直肠肿瘤组织与结直肠正常组织中UBE2M具有差异性表达（p<0.001）。Kaplan‐Meier发现高表达UBE2M患者相比于低表达呈现出更差的生存期。运用R语言对GEO数据库分析示UBE2M在结直肠癌组织中的表达量明显高于结直肠正常组织（P<0.001）,在总生存分析中发现UBE2M高表达患者生存期要明显低于低表达患者（p<0.05）。此外还发现UBE2M在结直肠肿瘤Kras突变中高表达,进一步分析发现尤其在G12D突变点呈现差异性更为明显。THPA数据库发现UBE2M在人正常结直肠组织与结直肠癌组织中抗体染色水平表现出了差异（P<0.001）。在HCT116细胞中进行敲低UBE2M后,运用CCK-8和平板克隆实验发现敲低后显著抑制HCT116细胞的增殖和克隆形成能力。流式细胞周期分析发现UBE2M基因被敲低后,HCT116细胞中停滞在G2/M期的细胞明显增多。结论1.UBE2M在结直肠癌组织中高表达,且与患者的总生存期相关。2.在结直肠癌组织G12D突变患者中UBE2M呈现高表达。3.下调UBE2M后,HCT116细胞的增殖和克隆形成能力受到抑制,大量HCT116细胞停滞在G2/M期。
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