【摘 要】
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目的:使用心肌纤维化小鼠模型,观察人参皂苷Rg1对细胞凋亡和心肌纤维化的治疗效果;选用H9C2心肌细胞进行体外研究,观察人参皂苷Rg1抑制心肌细胞凋亡和心肌纤维化的效应机制与调控TLR4表达的关系。方法:1.根据TLR4的表达分组运用GSEA富集分析方法对GTEx数据库的人体心脏转录组测序数据进行富集分析。2.动物实验:选取30只雄性C57BL/6小鼠,随机分为对照组,异丙肾上腺素（Isoprot
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目的:使用心肌纤维化小鼠模型,观察人参皂苷Rg1对细胞凋亡和心肌纤维化的治疗效果;选用H9C2心肌细胞进行体外研究,观察人参皂苷Rg1抑制心肌细胞凋亡和心肌纤维化的效应机制与调控TLR4表达的关系。方法:1.根据TLR4的表达分组运用GSEA富集分析方法对GTEx数据库的人体心脏转录组测序数据进行富集分析。2.动物实验:选取30只雄性C57BL/6小鼠,随机分为对照组,异丙肾上腺素（Isoproterenol,ISO）组以及中药人参皂苷Rg1干预组。ISO诱导建立心肌纤维化模型,分组干预后,通过HE、Masson、Sirius Red、免疫组化评价人参皂苷Rg1对心肌组织病理和纤维化的影响;TUNEL染色评价心肌细胞凋亡;qRT-PCR检测心肌组织中TLR4、Bax和Bcl-2等mRNA的转录水平,Western blotting检测心肌组织中TLR4、Bax以及Bcl-2等蛋白的表达水平。3.细胞实验:H9C2心肌细胞分为对照组,ISO组,ISO+TAK-242（TLR4信号通路抑制剂）组以及ISO+人参皂苷Rg1干预组。分组干预后,流式细胞术检测细胞凋亡水平,qRT-PCR检测心肌细胞中TLR4、Bax和Bcl-2等mRNA的转录水平,Western blotting检测心肌细胞中TLR4、Bax以及Bcl-2等蛋白的表达水平。结果:1.人体心脏组织RNA-seq数据GSEA富集分析表明,TLR4的高表达与凋亡以及纤维化经典通路TGF-β密切相关。2.心肌组织HE、Masson、Sirius Red、免疫组化结果显示,与对照组相比,ISO组小鼠心肌纤维化程度升高（P＜0.05）;与ISO组相比,人参皂苷Rg1干预组的小鼠心肌纤维化程度明显降低（P＜0.05）。TUNEL染色结果显示,与对照组相比,ISO组小鼠心肌组织凋亡细胞含量明显升高（P＜0.05）。与ISO组相比,人参皂苷Rg1组的小鼠心肌组织凋亡细胞含量明显降低（P＜0.05）。qRT-PCR结果显示,人参皂苷Rg1干预后,心肌纤维化模型小鼠的TLR4、Bax、COL-1、α-SMA的mRNA表达降低（P＜0.05）,Bcl-2的mRNA表达升高（P＜0.05）。Western blotting显示,相比于对照组,ISO组小鼠心肌组织中TLR4、Bax、COL-1、α-SMA表达升高,Bcl-2表达降低;相比于ISO组,ISO+Rg1组小鼠心肌组织中TLR4、Bax、COL-1、α-SMA蛋白的表达明显低于ISO组,Bcl-2表达则明显升高（P＜0.05）。3.流式细胞术结果显示,与对照组相比,ISO组H9C2心肌细胞的凋亡水平明显上升;与ISO组相比,ISO+Rg1组的H9C2心肌细胞凋亡水平明显下降。qRT-PCR结果显示,相比于对照组,ISO组H9C2心肌细胞的TLR4、Bax的mRNA表达水平升高,Bcl-2降低;与ISO组相比,ISO+TAK-242组H9C2心肌细胞中Bax的mRNA表达水平降低,Bcl-2升高（P＜0.05）,ISO+Rg1组H9C2心肌细胞中TLR4、Bax的mRNA表达水平降低（P＜0.05）,Bcl-2 升高（P＜0.05）。Western blotting 显示,在 H9C2 细胞中相比于对照组,ISO组中TLR4、Bax表达升高,Bcl-2表达降低;相比于ISO组,ISO+TAK-242组H9C2心肌细胞中Bax的蛋白表达水平降低,Bcl-2升高明显（P＜0.05）,ISO+Rg1组H9C2心肌细胞中TLR4、Bax的蛋白表达明显低于ISO组,Bcl-2表达升高（P＜0.05）。结论:人参皂苷Rg1具有抑制ISO诱导的心肌细胞凋亡和心肌纤维化的治疗效应;人参皂苷Rg1抑制心肌细胞凋亡和心肌纤维化的效应机制与调控TLR4表达有关。
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