【摘 要】
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目的验证早期生长反应因子1（Early growth response 1,EGR1）和转化生长因子1（Transforming growth factor-β1,TGF-β1）与肝包虫疾病的相关性。建立包虫抗原刺激巨噬细胞免疫反应模型,探讨EGR1对TGF-β1/Smad信号通路作用的分子机制,为深入研究包虫炎症反应提供部分理论基础。方法（1）通过RT-q PCR和Western blot方法检
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目的验证早期生长反应因子1（Early growth response 1,EGR1）和转化生长因子1（Transforming growth factor-β1,TGF-β1）与肝包虫疾病的相关性。建立包虫抗原刺激巨噬细胞免疫反应模型,探讨EGR1对TGF-β1/Smad信号通路作用的分子机制,为深入研究包虫炎症反应提供部分理论基础。方法（1）通过RT-q PCR和Western blot方法检测EGR1、TGF-β1在肝包虫患者组织中的表达,初步探索EGR1、TGF-β1与肝包虫病的相关性。（2）佛波酯（PMA）诱导人单核白血病细胞（THP-1）成为THP-1源性巨噬细胞,EG95抗原刺激THP-1源性巨噬细胞构建包虫免疫细胞模型,并通过质粒转染诱导THP-1源性巨噬细胞EGR1基因的沉默和过表达,将THP-1源性巨噬细胞分为对照组、EG95组、NC-EGR1+EG95组（过表达质粒阴性对照组）、OE-EGR1+EG95组（过表达质粒组）、NC-EGR1+EG95（干扰质粒阴性对照组）组和sh EGR1+EG95组（干扰质粒组）。（3）CCK8法检测EG95对THP-1源性巨噬细胞增殖。（4）通过RT-q PCR和免疫荧光检测各组THP-1源性巨噬细胞中EGR1和TGF-β1的m RNA表达和荧光强度变化。（5）用RT-q PCR和Western blot技术分别检测THP-1源性巨噬细胞中EGR1、TGF-β1、Smad2、Smad3、p-Smad2、p-Smad3基因和蛋白质的表达水平。（6）ELISA技术检测细胞因子IL-6和TNF-α的表达水平。结果（1）EGR1和TGF-β1在肝包虫患者组织中表达显著上调（P＜0.05）。（2）CCK8法检测EG95浓度为1μg/m L时,细胞存活率为80%,活力较好。（3）在THP-1源性巨噬细胞模型中,与对照组相比,EG95组EGR1、TGF-β1、Smad2、Smad3的基因表达水平均显著上调（P＜0.05）。（4）与EG95组相比,OE-EGR1+EG95组TGF-β1、p-Smad2和p-Smad3蛋白质表达显著升高（P＜0.05）。与EG95组相比,sh EGR1+EG95组TGF-β1表达水平下调,蛋白质p-Smad2、p-Smad3的表达水平也下降（P＜0.05）。（5）ELISA结果显示EG95组IL-6和TNF-α的表达显著高于对照组（P＜0.05）。结论（1）EGR1、TGF-β1与肝包虫病的发生有关,肝包虫病患者EGR1和TGF-β1细胞因子表达水平显著升高。（2）在EG95抗原诱导的THP-1源性巨噬细胞中,提示EGR1通过激活TGF-β1正向调控TGF-β1/Smad信号通路。
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