【摘 要】
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目的:探讨桂枝新加汤（GZXJD）治疗颈椎病,有效缓解疼痛的作用机制,为临床应用提供依据。方法:第一部分基于网络药理学与分子对接技术探讨桂枝新加汤治疗颈椎病作用机制,以指导动物实验方向;第二部分运用动静力失衡法构建颈椎间盘退变模型,采用Von Frey纤维丝检测各组机械缩足阈值（MWT）（术前、术后12w、治疗2w、4w、8w）;颈椎正侧位X片与MRI图像评估颈椎退变情况（术后12w、治疗后8w）
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目的:探讨桂枝新加汤（GZXJD）治疗颈椎病,有效缓解疼痛的作用机制,为临床应用提供依据。方法:第一部分基于网络药理学与分子对接技术探讨桂枝新加汤治疗颈椎病作用机制,以指导动物实验方向;第二部分运用动静力失衡法构建颈椎间盘退变模型,采用Von Frey纤维丝检测各组机械缩足阈值（MWT）（术前、术后12w、治疗2w、4w、8w）;颈椎正侧位X片与MRI图像评估颈椎退变情况（术后12w、治疗后8w）;HE染色检测颈椎间盘组织形态学变化;酶联免疫吸附测定（ELISA）检测外周血清P物质（SP）、前列腺素E2（PGE2）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）含量;免疫组化法（IHC）检测椎间盘内TNF-α、脊髓组织瞬时受体电位香草酸亚型1（TRPV1）表达水平（造模后12w、治疗后2w、4w、8w）;第三部分用GZXJD对比阳性药物——塞来昔布胶囊（Celebrex）对颈椎间盘退变模型大鼠同时灌胃4w,对比外周血清SP、PGE2、TNF-α含量与颈椎间盘TNF-α的表达水平,并对所有数据进行统计学分析比较。结果:1、网络药理学分析得到桂枝新加汤缓解颈椎病疼痛可能的药效成分有:桦木醇（Betulin）、植物甾醇（Stigmasterol）、槲皮素（Quercetin）、姜酮（Zingiberone）、鬼伞素（Coprine）等,与TNF、IL-6、IL-1β、PIK3CA、STAT3等多个炎症相关靶点相关,设计MAPK、PI3K-AKT等多条信号通路的表达;分子对接验证了Betulin与ESR1,Betulin、Quercetin、Shyobunone、Stigmasterol与FGF23,Betulin与IL-1β靶点的结合能绝对值高,提示可能为发挥药效作用的关键活性成分。2、GZXJD2、4、8w组较Model同时间段组外周血清SP、TNF-α含量明显降低（P＜0.01）;GZXJD4w和8w组较Model组同时间点外周血清PGE2含量明显减少（P＜0.01）。GZXJD组较Celebrex组血清中PGE2、TNF-α含量水平稍高,但差异无统计学意义（P＞0.05）;GZXJD组颈椎间盘HE染色可见炎症细胞浸润数量较同时间段Model组少。3、GZXJD 4w、8w组脊髓中TRPV1受体表达水平较Model 4w、8w组明显降低（P＜0.01）,GZXJD 4w组与8w组无统计学差异（P＞0.05）;GZXJD8w组颈椎间盘TNF-α表达水平低于Model 8w组（P＜0.05）;GZXJD组较Celebrex组颈椎间盘TNF-α表达水平低,但差异无统计学意义（P＞0.05）。结论:1、网络药理学分析结果提示桂枝新加汤可能是作用于TNF、IL-6、IL-1β等多个炎症靶点治疗颈椎病;2、动静力失衡法能有效加速大鼠颈椎间盘退变,成功构建颈椎间盘退变大鼠模型;3、桂枝新加汤能降低颈椎间盘退变大鼠血清中SP、PGE2、TNF-α及颈椎间盘内TNF-α表达,减少脊髓TRPV1离子通道表达,提高机械刺激疼痛阈值,起到缓解疼痛的作用;4、桂枝新加汤调节颈椎间盘退变大鼠全身与局部炎症反应作用效果与塞来昔布无明显差异。
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