【摘 要】
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为探讨多药耐药基因（mdr1）导入人胎盘源性间充质干细胞（MSCs）能否提高其对化疗药物的耐受性,我们采用灌流法联合密度梯度离心法自胎盘组织中分离扩增MSCs,脂质体转染法将携带有mdr1基因的逆转录病毒载体导入293T包装细胞,获得的病毒上清重复感染MSCs,通过RT-PCR、流式细胞术及免疫荧光染色检测mdr1基因在MSCs基因组中的整合和表达,同时对转染细胞的生物学特性及多向分化潜能加以测定
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为探讨多药耐药基因（mdr1）导入人胎盘源性间充质干细胞（MSCs）能否提高其对化疗药物的耐受性,我们采用灌流法联合密度梯度离心法自胎盘组织中分离扩增MSCs,脂质体转染法将携带有mdr1基因的逆转录病毒载体导入293T包装细胞,获得的病毒上清重复感染MSCs,通过RT-PCR、流式细胞术及免疫荧光染色检测mdr1基因在MSCs基因组中的整合和表达,同时对转染细胞的生物学特性及多向分化潜能加以测定;罗丹明排泌试验检测基因编码产物P-g170的功能活性,MTT法测定转染MSCs对多种化疗药物耐受性。在此基础上,采用γ-Co60照射法建立裸鼠骨髓造血功能损伤模型,研究转染MSCs经静脉回输后对紫杉醇化疗的保护作用。结果表明,mdr1基因可于MSCs中稳定转染和表达,转染后MSCs仍符合干细胞的生物学特性。基因转染后细胞可表达有功能活性的P-g170,且表现出典型的多药耐药表型,mdr1-MSCs体内移植可对裸鼠外周血和骨髓细胞的生成起化疗保护作用。结果提示,由逆转录病毒载体介导mdr1基因转染人胎盘源性MSCs可获得高效、稳定的功能性蛋白表达,此转染行为对于维持MSCs的干细胞特性是安全可行的,通过转染MSCs的体内移植能够增强机体对化疗的耐受程度,从而有望为提高大剂量化疗在肿瘤治疗中的应用提供可靠保证。
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