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垂体腺瘤(pituitary adenoma,PA)是颅内最常见的肿瘤之一,发病率仅次于脑胶质细胞瘤和脑膜瘤。而生长激素型垂体腺瘤(Growth hormone-pituitary adenoma,GH-PA)是常见的功能性垂体腺瘤(20%左右),临床上常表现为肢端肥大症,骨骺闭合前起病则表现为巨人症。目前最为安全有效的治疗方法为经鼻蝶的垂体瘤切除术。术后一周内低GH(<2.5 ng/ml)与年龄、性别相适的胰岛素类生长因子(Insulinlike growth factor-1,IGF-1)水平预示临床缓解,而在临床工作中发现,部分患者有延迟缓解症状,即未达到即刻缓解之标准但激素水平缓慢下降至正常,现有实验室指标如GH、IGF-1等不足以准确提示远期预后和延迟缓解,所以GH-PA的术后疗效预测仍然有待深入研究。RET(rearranged during transfection)是一种跨膜酪氨酸激酶受体,目前已经证实与多种内分泌肿瘤的转归和预后有密切联系。到目前为止,尚未有报道RET在正常人垂体中的表达情况,而其在垂体腺瘤中表达也需要进一步的研究,本研究拟从临床和基础两方面阐述RET在垂体腺瘤中的相关性,一则通过免疫组化和疾病随访观察RET在垂体腺瘤的转归和预后的预测作用,一方面从动物模型(垂体腺瘤模型以及癫痫模型)水平观察调控RET/GDNF信号通路对疾病的影响。实验一 RET的表达与生长激素型垂体腺瘤患者生长激素水平的相关性分析目的:探讨RET的表达和单纯生长激素型垂体腺瘤(GH-PA)术后缓解情况、术后GH水平的相关性。方法:收集并随访西京医院2010-2013年收治的单纯GH-PA经鼻蝶内镜手术患者20例(不缓解10例、即刻缓解6例、延迟缓解4例),监测术前、术后1周、3个月和1年血清GH水平,并取病理标本采用免疫组化检测RET的表达。结果:延迟缓解患者RET表达水平相比即刻缓解、不缓解患者较低(P<0.05);RET的表达水平与GH激素水平(术前、术后3个月、术后1年)无显著相关性(P>0.05),但与术后GH激素水平的升高(GH1年-GH1周)呈正相关(P<0.05)。结论:RET表达水平一定程度上能够预测患者的延迟缓解,且与术后GH激素水平升高正相关。实验二 调控RET依赖性GDNF信号通路对动物模型的影响目的:探究立体定向注射anti-GDNF抗体对匹鲁卡品诱导的大鼠癫痫模型和苯甲酸雌二醇诱导垂体腺瘤模型的影响。方法:选择成年SD大鼠雌雄各60只,雄性60只进入癫痫模型中分为:假手术组1(sham1组,n=20)、模型组1(model1,n=20),GDNF抑制剂组1(anti-GDNF1组,n=20);雌性60只进入垂体瘤模型中同样分为:假手术组2(sham2组,n=20)、模型组2(model2,n=20),GDNF抑制剂组2(anti-GDNF2组,n=20)。使用氯化锂-匹鲁卡品腹腔注射诱导癫痫模型(model1),使用苯甲酸雌二醇诱导垂体腺瘤(model2),各个sham组只给予等计量的生理盐水,各个anti-GDNF组在造模前2h给予大鼠双侧海马CA1区(model1组)或者垂体部位(model2组)立体定向注射anti-GDNF抗体。从而进行以下探究:1.model1大鼠造模后1、3、7d观察癫痫的发作频率,7d后采用脑电图监测(EEG)测定脑电波的变化情况,model2组在7d观察垂体前后,上下径和重量;2.在通过免疫组化方法测定海马CA1区域(model1)和垂体(model2)神经元数量变化(NeuN表达水平),3.造模后1d时使用western blot方法测定海马CA1区域(model1)和垂体区域(model2)GDNF、RET和P53蛋白的表达。结果:1.Model1组大鼠棘-慢波数量明显高于Sham1组,anti-GDNF1组以上指标较model1组显著减少(P<0.05),anti-GDNF2组的垂体大小相比model2组小(P<0.05);Model1组神经元大量凋亡,但anti-GDNF组凋亡较model1组显著减少(P<0.05),于此相同model2组神经元凋亡数量较anti-GDNF2多;两组模型中,GDNF、RET的表达均有不同程度的上调,但P53水平有所下降,而anti-GDNF1组大鼠海马CA1区相较model1组的GDNF、RET表达较model组明显下调,P53表达水平显著上降(P<0.05),model2组也有相同改变。结论:调控RET依赖性GDNF信号通路对垂体瘤和癫痫模型都有积极作用,能够保护神经元,抑制疾病进展。