重组人血管内皮抑制素抗小鼠肝癌H22作用研究

来源 :山西医科大学 | 被引量 : 0次 | 上传用户:zzuli666
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目的:观察重组人血管内皮抑制素(Endostar,恩度)对小鼠肝癌H22的抗血管生成作用,并对其机制进行初步探讨。方法:1、肝癌H22小鼠模型的建立:将冷冻保存在-80℃冰箱中的H22肝癌细胞复苏后,注射入昆明小鼠左腋下,7日后,肿瘤生成明显。在无菌条件下取肿瘤,以培养液调整其中瘤细胞密度至1×10*7个细胞/ml,用注射器吸取肿瘤悬液0.2ml注入32只4-5周龄的雄性昆明小鼠右腋下的皮下进行接种,建立动物模型。将32只小鼠随机分为A、B、C、D四组,每组8只。2、给药:在实验第一天A组开始给药,在实验第五天B组开始给药,在实验第九天C组开始给药。给药方法:每天腹腔内注入恩度,3mg/Kg。实验第五天四组小鼠同时接种肿瘤。D组只接种肿瘤不给药。实验第十八天宰杀小鼠,留取肿瘤组织备用。3、标本制备:眼眶取血后处死小鼠,解剖出肿瘤称重。将全部标本均经10%中性福尔马林固定,石蜡包埋组织,制成5μm厚切片,切片经二甲苯脱蜡,梯度酒精至水化;1%甲醇双氧水浸泡;0.125%胰酶消化,非免疫性动物血清封闭,抗CD34单克隆抗体标本,室温下孵育60分钟;生物素化二抗,37℃10分钟。链亲和素-过氧化物酶溶液室温孵育10分钟,DAB镜下控制显色,苏木素复染,中性树胶封片。4、观察指标:实验第九天天始,每天测量所有小鼠肿瘤大小,计算肿瘤体积。肿瘤体积=长径*横径2/2。计算肿瘤标本微血管密度。5、统计分析:分析实验第十八天不同给药组与对照组相比小鼠肿瘤体积和微血管密度是否有统计学差异。采用SPSS17.0专用统计软件进行数据统计分析。使用单因素方差分析对实验数据结果进行方差齐性检验和统计分析,进一步采用LSD-t检验对数据进行多组间的两两比较分析与推断。结果:实验第十八天:接种肿瘤当天开始腹腔给药组(B组)与对照组(D组)相比肿瘤体积和微血管密度有统计学差异(P<0.05)。接种肿瘤前开始给药组(A组)和接种肿瘤后开始给药组(C组)与对照组(D组)相比肿瘤体积和微血管密度没有统计学差异。结论:单独应用恩度(重组人血管内皮抑制素)有抗肿瘤作用,接种肿瘤时用药为最佳给药时机。
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